吉林白鹅肉用品系主要产肉性能的ISSR分子标记研究

摘要

本实验测定了吉林白鹅肉用品系70日龄鹅产肉性能，并应用ISSR标记技术，探索其在动物育种中的应用，研究其与肉用性状相关的分子标记，结果如下： 1、吉林白鹅肉用品系70日龄的屠宰率为84％，半净膛率为90.0％，全净膛率为80.2％。 2、用筛选出来的4种ISSR引物，对30只样本个体基因组DNA进行了ISSR扩增分析，得到962条扩增带，标记带为302条，特异带比率为31.4％。扩增的DNA片段分布在24个个体的基因组中，研究发现AK89、AK91、AK92、AK93四条引物均可用于鹅肉用性状的标记研究。 3、在屠体重性状分析中，确定了优势组合型有引物AK89的ABG、BG组合型，引物AK91的C型、AB、GHJK组合型，引物AK92的A型，引物AK93的A型、D型。确定了优势条带为引物AK89的A、B带，引物AK91的B、G带，引物AK92的G、H带，引物AK93的A带，最优势条带为引物AK91的B、G带，引物AK92的G带。 4、在全净膛重性状分析中，确定优势组合型有引物AK89的ABG、BG、GH和BGI组合型，引物AK91的C、AB、GHJK组合型，引物AK92的A、AEGH组合型，引物AK93的DI组合型。优势条带有引物AK89的A、B带，引物AK91的B、G、I带，引物AK92的A、E、H带，引物AK93的A、I带。最优势条带为引物AK89的A带，引物AK91的B带，引物AK92的A带，引物AK93的A带。 5、利用SASSystem软件对吉林白鹅肉用品系基因组DNAISSR扩增产物进行多态标记的方差分析，结果表明AK89-A、AK89-H、AK91-B、AK91-G、AK91-F、AK92-G、多态标记带与屠体重性状有显著相关；AK89-A、AK89-I、AK91-B、AK91-H、AK93-A、AK93-D多态标记带与全净膛重性状有显著相关，可利用以上各条带作为吉林白鹅肉用品系肉用性状标记位点研究。 6、确定优化的ISSR-PCR反应体系为10×缓冲液2.5μl，20mMMg2+2.0μl，5mMdNTP2.0μl，20μMPrimer2.0μl，100ng/μlTemplate2.0μl，2U/μlTaqDNApolymerase0.5μl，ddH2014μl，反应总体积25μl。优化反应程序为94℃预变性4min；94℃变性30sec，52℃退火30sec，72℃延伸2min，循环30次；最后72℃延伸7min。反应结束保存在4℃。

目录

文摘

英文文摘

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1引言

1.1本文研究的目的和意义

1.2本文研究的主要内容

2文献综述

2.1禽类经济性状遗传标记研究进展

2.1.1常规的遗传标记与禽类经济性状的相关研究

2.1.2 DNA分子水平遗传标记与禽类经济性状的相关研究

2.2简单重复序列间扩增(ISSR)标记

2.2.1 ISSR技术的原理

2.2.2 ISSR技术的优缺点

2.2.3 ISSR技术在动物遗传育种中的作用

3材料与方法

3.1试验材料

3.1.1试验鹅及屠宰实验

3.1.2主要试剂及配制方法

3.1.3主要仪器设备

3.2试验方法

3.2.1基因组DNA的提取

3.2.2 DNA浓度和质量的检测

3.2.3 PCR扩增

3.2.4 ISSR引物设计及筛选

3.3资料统计分析

3.3.1原始数据的最小二乘校正

3.3.2特异性条带组合型及特异性条带的效应分析模型

3.3.3优势条带的替代效应分析

3.3.4多态标记与经济性状的关联程度分析

4结果与分析

4.1基因组DNA浓度和纯度

4.2基因组DNA0.8％琼脂糖电泳检测结果

4.3 ISSR-PCR反应体系与程序

4.3.1模板浓度

4.3.2 dNTP和MgCl2浓度

4.3.3 Taq酶用量

4.3.4引物浓度

4.3.5退火温度

4.3.6延伸时间

4.3.7循环数

4.4引物筛选

4.5基因组ISSR扩增结果

4.6各ISSR引物扩增所得条带数及各条带的碱基对数

4.7 ISSR标记的多态性

4.8吉林白鹅肉用品系产肉性能测定

4.9 ISSR特异性条带组合型与肉用性状的关系

4.9.1屠体重性状特异性条带组合型效应分析

4.9.2全净膛重性状特异性条带组合型效应分析

4.9.3肉用性状优势条带组合型

4.10 ISSR特异性条带对鹅肉用性状的影响

4.10.1特异性条带分析

4.10.2优势条带的替代效应

4.11多态标记与肉用性状的关联

5讨论

5.1基因组DNA提取

5.2 ISSR反应条件优化与稳定性分析

5.3关于特异带、优势带与条带组合型

5.4 ISSR标记与主要肉用性状的关系

5.5关于数量性状的分子标记

6小结

参考文献

附录1

附录2

致谢