IFN-γ诱导鹦鹉热嗜衣原体持续性感染及相关基因的表达

摘要

目的：建立IFN-γ诱导的鹦鹉热嗜衣原体（Chlamydophila psittaci，Cps）持续性感染的细胞模型，检测与Cps6BC持续性感染相关基因的表达变化。
　　方法：
　　体外培养HeLa单层细胞感染Cps6BC标准菌株，分别用5、15、25、35、45、55ng/mL的人重组干扰素-γ（recombinant hunan IFN-γ，rhIFN-γ）诱导Cps6BC持续性感染30h和用35ng/mL rhIFN-γ诱导12、24、36、48、60h，利用间接免疫荧光染色法（indirect immunofluorescence assay，IFA）检测Cps6BC感染能力的变化。用IFA和透射电镜检测rhIFN-γ诱导Cps6BC持续性感染后包涵体形态的变化。rhIFN-γ诱导Cps6BC持续性感染后，去除诱导剂，补充足量的L-色氨酸，利用IFA和透射电镜检测Cps6BC感染能力和包涵体形态的恢复情况。用Realtime-PCR检测Cps6BC持续性感染状态下目的基因的mRNA表达水平的变化以及Western blot检测CPSIT_0844、CPSIT_0594蛋白表达水平的变化。
　　结果：
　　用不同浓度的rhIFN-γ诱导Cps6BC标准株持续性感染30h后，Cps6BC的感染能力均降低，且呈明显的剂量依赖关系。35ng/mL rhIFN-γ诱导不同时间后， Cps6BC的感染能力也出现不同程度的下降，尤其是36、48、60h后感染能力显著降低。IFA和透射电镜观察显示，rhIFN-γ诱导后，Cps6BC包涵体体积变小，结构疏松，并可见异形网状体，成熟子代原体数目减少，呈现典型的持续性感染特征。去除诱导剂，补充足量的L-色氨酸后，Cps6BC的感染能力及包涵体形态均可恢复到急性感染状态。
　　rhIFN-γ诱导Cps6BC持续性感染后，CPSIT_0844、CPSIT_0846、CPSIT_0959、CPSIT_0594、CPSIT_0310、CPSIT_0870、CPSIT_0057、CPSIT_0208在mRNA水平的表达均发生了一定的改变。核糖体蛋白CPSIT_0870在2～36h显著上调，而半胱氨酸脱硫酶CPSIT_0959在36h、48h显著下调。Ⅲ型分泌系统效应蛋白CPSIT_0594、CPSIT_0844均在2～48h上调，且分别在36h和48h显著上调，而CPSIT_0846在2～24h显著上调，36h后显著下调。膜蛋白CPSIT_0057、CPSIT_0310在2～48h上调，而CPSIT_0208在48h后下调。Western blot结果显示，rhIFN-γ诱导Cps6BC持续性感染后，CPSIT_0844、CPSIT_0594蛋白表达的改变与其mRNA水平的表达变化一致。
　　结论：
　　1.建立了rhIFN-γ诱导的Cps6BC持续性感染细胞模型；
　　2. CPSIT_0844、CPSIT_0846、CPSIT_0959、CPSIT_0594、CPSIT_0310、CPSIT_0870、CPSIT_0057、CPSIT_0208在rhIFN-γ诱导Cps6BC持续性感染过程中的表达出现一定的变化，这些基因可能与衣原体持续性感染有关。

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