电针通过调节GSK-3β信号发挥抗急性缺血性脑损伤的作用

摘要

目的：探索电针是否通过调节糖原合成酶激酶-3β信号通路的变化而发挥抗急性缺血性脑损伤的作用。 方法：75只雄性SD大鼠随机分为：假手术组（Sham组）、手术组（M CAO组）、电针组（EA组）、GSK-3β抑制剂组（SB415286组）和电针+GSK-3β抑制剂组（EA+SB组）共5组（n=15）；除假手术组外，手术组、电针组、GSK-3β抑制剂组、电针组+GSK-3β抑制剂组均制作大脑中动脉闭塞模型。假手术组动物线栓阻塞大脑中动脉不入颅，其余均接受其它组相同的操作步骤。选择大鼠“百会”和“水沟”穴位作为针刺穴位，于电针组、电针组+GSK-3β抑制剂组在再灌注时开始接受电针持续刺激30min。脑缺血再灌注后，断头取大鼠脑海马组织。TTC染色评估脑梗死体积损伤水平；TUNEL检测细胞凋亡情况；Western Blot以及RT-qPCR法检测各组大鼠海马组织GSK-3β的蛋白和基因的表达水平。 结果：（1）脑梗死体积变化：Sham组可见较少的脑梗死体积，脑缺血再灌注后，MCAO组脑梗死体积比率明显增加（P＜0.05）。EA组、SB组脑梗死体积比率较MCAO组比较明显减少（P＜0.05）。其中EA+SB组分别与MCAO组、SB组、EA组比较脑梗死体积比率减少，有统计学差异（P＜0.05）。EA组和SB组脑梗死体积比率相比较，无统计学意义（P＞0.05）。 （2）细胞凋亡变化：Sham组可见少量细胞凋亡，MCAO组细胞凋亡数目显著增多（P＜0.05）。EA组、SB组细胞凋亡数目较MCAO组比较减少（P＜0.05）。EA+SB组与EA组、SB组相比细胞凋亡数目减少（P＜0.05）。EA组和SB组细胞凋亡数目比较，无统计学意义（P＞0.05） （3）Western Blot检测：Sham组GSK-3β蛋白少量表达，MCAO组大鼠海马GSK-3β表达明显升高，有统计学差异（P＜0.05）。EA组、SB组GSK-3β蛋白表达与MCAO组相比明显减少（P＜0.05）。SB415286抑制G SK-3β作用下，电针刺激能够有效降低GSK-3β表达，EA+SB组GSK-3β表达低于SB组和EA组（P＜0.05）。EA组和SB组GSK-3β蛋白表达相比较，无统计学意义（P＞0.05）。 （4）RT-qPCR法检测：Sham组GSK-3βmRNA相对表达量较少，MCAO组大脑海马GSK-3βmRNA相对表达量显著升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。EA组、SB组GSK-3βmRNA相对表达量与MCAO组相比明显减少（P＜0.05）。在SB415286抑制GSK-3β作用下，电针刺激可以有效减少GSK-3βmRNA相对表达量，EA+SB组与SB组、EA组比较，GSK-3βmRNA相对表达量减少（P＜0.05）。EA组和SB组GSK-3βmRNA相对表达量比较，无统计学意义（P＞0.05）。 结论：（1）电针可减轻缺血性脑损伤大鼠脑梗死体积、减少细胞凋亡发挥脑保护效果。（2）特异性GSK-3抑制剂SB415286，可抑制缺血性脑损伤GSK-3的活性从而发挥抗缺血性脑损伤。（3）电针刺激缺血性脑损伤的作用机制和GSK-3信号有关联。电针能够通过抑制GSK-3β信号的活性而发挥脑神经保护作用。

目录

声明

英文缩略词表

第1章 绪论

第2章 材料与方法

2.1实验动物

2.2 主要实验仪器与设备

2.5号线栓线

2.3主要实验试剂

2.4.1动物分组

2.4.2侧脑室给药

2.4.3 大脑中动脉栓塞造模（MCAO）

2.4.4电针方法

2.4.5脑梗死体积测定

2.4.6 TUNEL细胞凋亡检测

2.4.7 RT-qPCR检测

2.4.8 Westerblot检测

2.4.9 统计学方法

第3章 结果与分析

3.1 脑梗死体积测定结果

3.2 各组大鼠海马细胞凋亡情况

3.3 RT-qPCR GSK-3βmRNA转录的检测结果

3.4 GSK-3β的蛋白印迹检测结果

第4章 讨论

4.1 缺血性脑卒中的治疗现状

4.2动物模型的建立

4.3电针对脑缺血再灌注损伤的作用

4.4 电针通过调节GSK-3β信号发挥抗急性缺血性脑损伤的作用

第5章 结论

参考文献

综述:GSK-3在电针抗急性缺血性脑损伤的作用

攻读学位期间的科研成果

致谢