ITSN2与Eps8相互作用并促进其降解

摘要

人Eps8(Epidermalgrowthfactorreceptorpathwaysubstrate8)蛋白是一类重要的信号分子。最初被鉴定为表皮生长因子受体EGFR的重要激酶活性底物之一，后来发现Eps8也是受体酪氨酸激酶的活性底物。人的Eps8基因定位于第12条染色体上，编码的蛋白有两个亚型：P97(97KD)和P68(68KD)。研究表明，Eps8可以调节表皮生长因子EGF依赖的小G蛋白Rac的活性进而调控细胞骨架肌动蛋白的构建和重排。Eps8还能调节Rab5的活性，参与受体介导的细胞内吞作用并影响Ras和Rac之间的信号转导。此外Eps8还参与多种肿瘤细胞的增殖和侵袭，增强促有丝分裂信号的释放从而导致肿瘤细胞的恶变。
　　 本文中我们用酵母双杂交的方法，以Eps8作为诱饵蛋白对人脑cDNA文库进行筛选，鉴定出了一个新的与Eps8相互作用的蛋白-ITSN2。我们克隆并表达了ITSN2基因，免疫共沉淀实验的结果证实了Eps8和ITSN2蛋白在体内能够结合。同时发现无论是内源的还是外源的Eps8和ITSN2蛋白都在细胞质中有明显的共定位。GSTpull-down实验证实了Eps8和ITSN2在体外能够相互作用。此外，我们对Eps8蛋白和酵母双杂交筛选出的ITSN2片段进行了分段表达，进一步证实了Eps8和ITSN2蛋白的相互作用区域，即Eps8的260-306位氨基酸区域和ITSN2的CC结构域。这些结果清楚地表明Eps8和ITSN2蛋白在体外和体外都能相互作用。
　　 本文还初步研究了Eps8和ITSN2蛋白相互作用的生理功能。蛋白质的降解实验和免疫荧光实验表明过表达ITSN2诱导Eps8蛋白质的降解。Eps8蛋白质的降解通过加入溶酶体抑制剂氯化铵后能够得到显著缓解，说明ITSN2可能通过溶酶体途径促进Eps8蛋白的降解。这些结果表明ITSN2能与Eps8相互作用并促进其降解。