鼻咽癌患者外周血循环肿瘤细胞的检测及其临床价值

摘要

目的：通过对鼻咽癌患者外周血循环肿瘤细胞（circulating tumor cell，CTC）的检测，分析循环肿瘤细胞与鼻咽癌患者的原发灶大小、淋巴结转移、远处转移、组织病理类型、疾病进展等临床病理特征间的相关性，为判断预后及治疗方案的决策提供一定理论依据。
　　方法：选自2014年3月至2015年2月于宜昌市中心人民医院、葛洲坝中心医院、第二人民医院、仁和医院首次就诊的鼻咽癌患者共68例，依据鼻咽癌2008版TNM分期标准，I期5例，Ⅱ期12例，Ⅲ期28例，Ⅳa期13例，Ⅳb期10例；其中T1期19例，T2期23例，T3期15例，T4期11例；N0期13例，N1a期8例，N1b期10例，N2期24例，N3期13例；M0期58例，M1期10例。所有患者均经病理活检确诊，且TMN分期明确，无其他肿瘤，无活动性感染，无肝、肾、心脏等重要器官功能异常。I-Ⅱ期鼻咽癌患者首诊时予以根治性调强放疗，处方剂量为95％PGTVnx=72.6Gy/2.2Gy/f×33F，95%PGTVnd=72.6Gy/2.2Gy/f×33F，95%PTV1=62.04Gy/1.88Gy/f×33F，95%PTV2=56.76Gy/1.72Gy/f×33F；Ⅲ-Ⅳ期患者先予以2周期DF（顺铂，25mg/m2， d1-d3；5-氟脲嘧啶600mg/m2，d1-d5）方案诱导化疗，再行根治性调强放疗（方案同上），放疗结束休息1月后，31例患者再接受4周期化疗（DF方案或TD方案）。所有患者于临床治疗前抽取外周血7.5ml进行CTC检测，采用免疫磁珠阴性法富集鼻咽癌患者外周血中的肿瘤细胞，富集后细胞涂片，应用CD45、CK18、FISH-CEP8及DAPI标记细胞。同时抽取10例健康人全血标本作为CTC检测效率的对照组。
　　结果：68例鼻咽癌患者外周血中67例检测出CTC，检出率为98.5%，CTC的阳性率（CTC≥3为阳性）为60.3%（41/68），10例健康人外周血中未检测出CTC。依据TNM分期（Ⅰ-Ⅲ期与Ⅳ期）不同，CTC阳性率分别是51.1%（23/45）、78.3%（18/23）， CTC阳性率差异有统计学意义（P=0.038）；根据淋巴结转移状况（N0、N1、N2、N3期）不同，CTC阳性率分别为38.5%（5/13）、55.6%（10/18）、66.7%（16/24）、76.9%（10/13），CTC阳性率差异不具有统计学意义（P=0.194）；根据原发肿瘤大小（T1、T2、T3、T4期）不同，患者CTC阳性率分别为36.8%（7/19）、65.2%（15/23）、73.3%（11/15)、72.7%（8/11），CTC阳性率差异无统计学意义（P=0.096）；根据远处转移情况（M0、M1期）不同，CTC阳性率分别为55.2%（32/58）、90.0%（9/10）， CTC阳性率差异有统计学意义（P=0.043）。鼻咽癌患者CTC阳性率与患者的性别、年龄、病理分型不存在相关性。
　　68例鼻咽癌患者检测出CTC数量范围在0-12个/7.5ml，平均（4.13±2.51）个/7.5ml。随着临床分期的增加，CTC数量也随之增加：Ⅰ-Ⅲ（3.71±2.33）、IV（4.96±2.69），但CTC数目差异不具有统计学意义（P=0.052）。较于未远处转移患者，CTC数量在转移患者中明显增高：M0（3.86±2.36）、M1（5.70±2.91），两组CTC数目差异具有统计学意义（P=0.031）。将患者分为Ⅰ组（CTC＜5）和Ⅱ组（CTC≥5），Ⅰ组晚期（IV期）患者所占比率为23.1%，Ⅱ组晚期（IV期）患者所占比率为48.3%，差异有统计学意义（P=0.04）；Ⅰ组远处转移（M1）患者所占比率为7.7%，Ⅱ组远处转移（M1）患者所占比率为24.1%，两组差异无统计学意义（P=0.085）。
　　对68例鼻咽癌患者进行12个月的随访，发现有17例出现疾病进展，1年疾病无进展生存率为74.6%。根据不同分期（Ⅰ-Ⅱ和Ⅲ-Ⅳ期），Ⅰ-Ⅱ期患者中有1例进展（5.9%），Ⅲ-Ⅳ期患者有16例进展（32.0%），差异无统计学意义（P=0.05）；CTC阳性患者中有14例进展（34.1%），CTC阴性患者中有3例进展（11.5%），差异有统计学意义（P=0.047）。在Ⅲ-Ⅳ期鼻咽癌患者中，31例接受诱导化疗+根治性放疗+辅助化疗的患者中有5例出现疾病进展，疾病进展率为16.1%。而19例接受诱导化疗+根治性放疗的患者中有11例出现疾病进展，疾病进展率为57.9%；16例疾病进展患者中CTC阳性患者14例（87.5%），34例无疾病进展患者中CTC阳性患者21例（61.8%），logistic回归分析发现CTC阴/阳性、治疗方式与疾病进展存在相关性（P<0.05）。在35例CTC阳性Ⅲ-Ⅳ期患者中，接受诱导化疗+根治性放疗患者的疾病进展率为83.3%，接受诱导化疗+根治性放疗+辅助化疗患者的疾病进展率为17.4%，差异有统计学意义（P<0.05）。
　　结论：1.运用免疫染色-荧光原位杂交技术，可以检测到鼻咽癌中循环肿瘤细胞。2.本研究发现鼻咽癌患者CTC的阳性率与肿瘤临床总分期及远处转移密切相关，分期越晚、有远处转移患者的阳性率明显高于分期较早、无远处转移者。CTC阳性率与患者的性别、年龄、病理分型、T分期、N分期无相关性。3.本研究发现鼻咽癌患者CTC数目与鼻咽癌的不良生物学行为有关，临床分期越晚，有远处转移者，CTC数量越高。4.鼻咽癌患者1年疾病无进展生存率为74.6%，且分期越晚、CTC阳性，发生疾病进展的可能性越高。5.对于CTC阳性Ⅲ-Ⅳ期鼻咽癌患，诱导化疗+根治性放疗+辅助化疗可能是更理想的治疗方式。

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英文缩略词表

引言

材料与方法

1 设备与材料

1.1.主要仪器

1.2.主要试剂

1.3.主要试剂的配制

1.4.试验对象

2 试验方法

2.1.鼻咽癌患者CTC的分离与鉴定

2.2.CD44(+)CTC的分离与鉴定

2.3.分析内容

2.4.统计分析

结果

1.利用CD45/CK18/FISH-CEP8可检测出鼻咽癌患者CTC

2 循环肿瘤细胞阳性率与临床病理参数的关系

2.1.循环肿瘤细胞阳性率与性别、年龄、病理分型的关系

2.2.循环肿瘤细胞阳性率与临床分期的关系

2.3.循环肿瘤细胞阳性率与原发肿瘤大小的关系

2.4.循环肿瘤细胞阳性率与淋巴结转移情况的关系

2.5.循环肿瘤细胞阳性率与远处转移情况的关系

3 循环肿瘤细胞数目与临床病理参数的关系

4 循环肿瘤细胞与鼻咽癌患者预后的关系

4.1.循环肿瘤细胞阳性率和疾病进展的关系

4.2.循环肿瘤细胞阳性率与Ⅲ-Ⅳ期患者治疗疗效的关系

5 FISH-CEP8/CD45/CD44可检测出CD44+CTC

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述:循环肿瘤细胞侵袭转移的研究进展

后记

附录：攻读硕士学位期间发表的部分学术论著