外周血循环肿瘤细胞的分离检测及其性质研究

目录

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中英文缩略词对照表

第一章 绪论

1.1 循环肿瘤细胞（CTCs）概述

1.2 国内外研究进展

1.2.1 常见的CTCs富集与分离技术

1.2.2 常见的CTCs检测与分析技术

1.2.3 集富集分离与检测分析于一体的综合系统

1.3 研究的目的及意义

1.4 主要研究内容

第二章 CTCs分离设备的研究与开发

2.1 分离装置的设计及工作原理

2.1.1 分离仪

2.1.2 分离盘

2.1.3 分离膜

2.1.4 分离操作流程

2.2 图像识别软件的开发

2.3 本章小结

第三章 CTCs分离检测方法的建立及应用

3.1 实验仪器与材料

3.1.1 实验材料

3.1.2 主要实验试剂

3.1.3 主要实验仪器

3.1.4 试剂配制

3.2 实验方法

3.2.1 CTCs分离检测方法的建立

3.2.2 不同孔径分离膜的筛选

3.2.3 富集液的优化

3.2.4 稳定性测试

3.2.5 重复性测试

3.2.6 PBS体系中肿瘤细胞回收率和检测限的测定

3.2.7 血液体系中肿瘤细胞回收率和检测限的测定

3.2.8 比对实验

3.2.9 临床血样中CTCs的分离筛选

3.3 实验结果

3.3.1 不同类型细胞分离染色结果

3.3.2 不同孔径分离膜的筛选结果

3.3.3 富集液的优化

3.3.4 稳定性测试

3.3.5 重复性测试

3.3.6 PBS体系中肿瘤细胞回收率和检测限的测定

3.3.7 血液体系中肿瘤细胞回收率和检测限的测定

3.3.8 比对实验

3.3.9 临床血样中CTCs的分离筛选

3.4 本章小结

第四章 肿瘤细胞中CK18基因mRNA表达量的检测

4.1 实验仪器与材料

4.1.1 实验材料

4.1.2 主要实验试剂

4.1.3 主要实验仪器

4.1.4 试剂配制

4.2 实验方法

4.2.1 静脉血中分离出的肺癌A549细胞的体外培养

4.2.2 细胞总RNA的提取

4.2.3 cDNA的合成

4.2.4 cDNA的鉴定

4.2.5 A549细胞中CK18基因 mRNA表达量的检测

4.3 实验结果

4.3.1 静脉血中分离出的肺癌A549细胞的体外培养

4.3.2 总RNA的提取

4.3.3 cDNA普通PCR鉴定结果

4.3.4 CK18基因mRNA表达量检测结果

4.4 本章小结

第五章 肿瘤细胞中EGFR基因突变的检测

5.1 实验仪器与材料

5.1.1 实验材料

5.1.2 主要实验试剂

5.1.3 主要实验仪器

5.2 实验方法

5.2.1 EGFR基因序列

5.2.2 基于测序的EGFR基因突变检测

5.2.3 基于数字PCR的EGFR-T790M突变检测

5.2.4 基于数字PCR的EGFR-L858R突变检测

5.3 实验结果

5.3.1 A549细胞EGFR基因突变测序分析

5.3.2 基于微滴式数字PCR的T790M突变检测结果

5.3.3 基于微滴式数字PCR的L858R突变检测结果

5.4 本章小结

第六章 结论与展望

6.1 结论

6.2 展望

参考文献

附录A CD-PRIME操作说明

攻读学位期间取得的成果

致谢