α-半乳糖苷酶基因MEL1在大肠杆菌和酵母中的表达

摘要

本研究通过比较α-半乳糖苷酶基因MEL1在酿酒酵母、大肠杆菌、毕赤酵母中的表达情况，来选择α-半乳糖苷酶适宜的表达系统，为α-半乳糖苷酶最终的工业化生产奠定基础.1.α-半乳糖苷酶基因MEL1在酿酒酵母中的表达。　　本文揭示了毕赤酵母可进行高密度发酵，蛋白具有较好的分泌能力，糖基化程度低，α-半乳糖苷酶可进行组成型分泌表达，此为α-半乳糖苷酶的工业化生产奠定了基础.通过比较三种表达系统表达α-半乳糖苷酶的情况，毕赤酵母表达系统较适合MEL1基因的表达的特性。

目录

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摘要

第一章前言

1.1 α-半乳糖苷酶研究概况

1.1.1 α-半乳糖苷酶的结构特点

1.1.2 α-半乳糖苷酶的专一性

1.1.3 α-半乳糖苷酶的活性研究

1.1.4 α-半乳糖苷键的分布

1.1.5 α-半乳糖苷类键的应用

1.2 MEL1基因的研究进展

1.2.1 MEL1基因的特点

1.2.2蛋白序列结构特点

1.2.3 MEL基因家族

1.2.4 MEL1基因在酵母双杂交系统中的应用

1.3酿酒酵母表达系统

1.3.1用于基因表达的宿主菌-酿酒酵母

1.3.2用于酵母基因表达的两类载体

1.3.3酿酒酵母基因表达系统研究现状及其优缺点

1.4大肠杆菌表达系统

1.4.1表达载体

1.4.2研究进展

1.5毕赤酵母表达系统

1.5.1毕赤酵母表达宿主菌

1.5.2常用载体及其特点

1.5.3载体的整合

1.5.4外源蛋白翻译后修饰

1.5.4展望

1.6问题的提出

1.7课题研究的来源、意义与目标

第二章a-半乳糖苷酶组成型表达基因在酿酒酵母中的表达

2.1材料和方法

2.1.1材料

2.1.2方法

2.2结果与分析

2.2.1载体构建

2.2.2酵母基因组DNA的提取

2.2.3 MEL1基因的克隆与测序

2.2.4重组质粒pGAD-GAL的构建及筛选

2.2.5 pGAD-Gal重组载体连接部分

2.2.6重组质粒pGAD-GAL转化酵母

2.3讨论

第三章α-半乳糖苷酶基因MEL1在大肠杆菌中的表达

3.1材料和方法

3.1.1材料

3.1.2方法

3.2结果与分析

3.2.1载体构建

3.2.2酵母基因组DNA的提取结果

3.2.3 MEL1基因的扩增

3.2.4表达载体pRSET的酶切

3.2.5阳性克隆的筛选

3.2.6 pRSET-Gal重组载体连接部分

3.2.7表达产物的SDS-PAGE分析

3.2.8表达产物的活性检测

3.3讨论

第四章α-半乳糖苷酶基因MEL1在毕赤酵母中的组成型表达

4.1材料和方法

4.1.1材料与试剂

4.1.2方法

4.2结果与分析

4.2.1载体构建

4.2.2酵母基因组DNA的提取

4.2.3质粒pGAPZ α A的制备

4.2.4 MEL1基因的克隆

4.2.5重组质粒pGAPZ α-GAL的构建及筛选

4.2.6 pGAPZ α-Gal重组载体连接部分

4.2.7重组质粒pGAD-GAL转化酵母

4.2.8制作标准曲线

4.2.9 α-半乳糖苷酶的表达分析

4.3讨论

第五章总结

参考文献

附录A.缩略词表

附录B.主要试剂配制

附录C.MEL1基因序列

附录D.MEL1测序报告

致谢

作者简历