三角酵母D-氨基酸氧化酶和(His)<,6>的融合蛋白基因在大肠杆菌中的克隆和表达

摘要

通过PCR的方法实现了三角酵母D-氨基酸氧化酶基因（DAAO）和6-His多肽基因的融合；将融合基因连接到质粒载体pET-28a，经过菌落PCR筛选得到了重组质粒pET-DAAOHis ；重组质粒转化BL21(DE3) 感受态细胞, 得到重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET-DAAOHis 。分别对重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET-DAAO 和BL21(DE3)/pET-DAAOHis进行诱导表达和酶活测定，结果表明，融合蛋白DAAOHis的酶活比DAAO的酶活要高出70％，说明通过基因工程手段可以实现DAAO和6-His多肽的融合表达，为D-氨基酸氧化酶的分离纯化和物理化学性质的后续研究奠定了基础。