由大肠杆菌产生的修饰的三角酵母D－氨基酸氧化酶制备头孢菌素烷基7β－(4－羧丁基酰胺)酸的方法

摘要

酶法制备头孢菌素烷基7β－(4－羧丁基酰胺)酸,是通过在大肠杆菌中产生的修饰过了的三角酵母(TrigonopsisVariabilis)D－氨基酸氧化酶进行的,该方法包含:(1)分离相应于编码D－氨基酸氧化酶基因的DNA;(2)去除所述的基因中的内含子;(3)将得到的DNA片段插入在大肠杆菌中能够复制的质粒;(4)合成含有编码6个组氨酸的一段核苷酸序列,融合到基因结构区的5’端;(5)用所得的重组质粒转化大肠杆菌;(6)培养转化了的大肠杆菌细胞;和(7)通过亲和层析回收前面培养细胞的D－氨基酸氧化酶。