扬奇青霉α-半乳糖苷酶agl1基因在大肠杆菌中的表达与纯化研究

摘要

提取扬奇青霉总RNA,反转录合成Cdna,PCR扩增α-半乳糖苷酶agll基因的编码区DNA序列,连接到原核表达载体pET28a(+)的多克隆位点,获得重组表达载体,转化大肠杆菌BL21,通过IPTG诱导获得agll基因的特异性表达.结果表明:8 mol/L尿素变性处理后的重组蛋白,经过Ni2+亲和柱纯化,SDs-PAGE检测该重组蛋白分子量约82 ku,与预测结果相符.纯化的酶蛋白依次经过6、4、2 mol/L和0 m01/L尿素梯度透析复性后,a-半乳糖苷酶酶活为0.4 U/ml.