禽用益生菌的分离鉴定、酶的性质研究及其初步应用

摘要

滥用抗生素已经成为当今畜牧业的一个重大问题，科研工作者正努力寻找抗生素的替代品。益生菌是一种非致病性的微生物，是近年来发展起来的一种新型饲料添加剂。大量实践及研究表明，多种芽孢杆菌对动物正常生理状态的维持和生长都有重要意义，是益生菌菌种开发的重要来源。 该研究依据常规的酶活测定法，从微生态制剂、健康雏鸡的肠道和土壤中分离筛选出三株菌(B、N和WS-3L)作为益生菌的有用添加菌。用针对细菌域通用引物，特异性扩增细菌的16SrDNA片段，对菌株进行分子生物学鉴定，分别为蜡样芽孢杆菌、乳酸杆菌和地衣芽孢杆菌。同时，通过培养条件和培养基优化试验，初步确定其最佳培养基为l％豆饼粉，0.5％鱼粉，0.5％玉米淀粉，0.5％半乳.甘露糖，0.5％NaCl。 同时，该试验还对芽孢杆菌WS-3L菌株产生的微生物酶(α-淀粉酶)的性质进行了研究。结果表明，产生的a.淀粉酶Amy[，经过多步纯化，酶的回收率为15.5％，比活提高了345倍。该酶的最适反应温度为45℃，最适反应pH为6.5，在pH7.0～8.0，40℃以下酶活较稳定；离子Cu<'2+>、NH<,4><'+>、Ag<'+>、Hg<'+>、EDTA和SDS对酶活力有显著抑制作用，而其他一些常见金属离子如Na<'+>、K<'+>则对酶活影响不大。玉米淀粉对AmyL有很高的吸附率，预示这可以作为快速固定该酶的一个简易方法应用到实际生产中。 通过设计雏鸡试验，将三株益生菌(B、N和WS-3L)和其产生的酶作为一种新的添加剂使用，对蛋雏鸡的生长性能有一定的促进作用。能提高饲料利用率，促进动物的生长，并能增强蛋雏鸡抗病能力，减少死淘率。因此，作为一种新型的微生态制剂其具有良好的开发潜力，能够提高动物的生长性能。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章文献综述

1动物益生菌的研究进展

1.1益生菌的发展历史及应用现状

1.2肠道微生物生态系统及菌群失调

1.3益生菌改善肠微生物生态学的作用机制

1.4益生菌的筛选标准

1.5益生菌制剂

1.6益生菌的应用效果

2微生物酶制剂的应用研究

2.1饲用微生物酶制剂的种类及其微生物来源

2.2饲用微生物酶制剂的作用机制

2.3饲用微生物酶制剂在饲料中的应用研究现状

2.4饲用酶制剂的注意事项

3本课题研究的意义和主要内容

第二章益生菌的分离、鉴定及培养优化

1材料与方法

1.1材料

1.2方法

2结果与分析

2.1酶活的测定结果

2.2菌的生长曲线

2.3菌落的形态学特征

2.4菌的分子生物学鉴定

2.5菌的培养

3讨论

3.1益生菌的种属特异性

3.2益生菌的鉴定方法

3.3培养基的优化

4小结

第三章α-淀粉酶性质的研究

1材料与方法

1.1材料

1.2方法

2结果与分析

2.1酶的纯化结果

2.2酶的水解性质

2.3pH和温度对酶活力和稳定性的影响

2.4化学试剂对酶活力的影响

2.5不同淀粉对酶的吸附率

3讨论

3.1温度、pH对酶活的影响

3.2金属离子对酶活的影响

4小结

第四章益生菌和酶结合对产蛋雏鸡的初步应用

1材料与方法

1.1材料

1.2试验方法

2结果与分析

3讨论

4小结

参考文献

附录

致 谢

作者简介