阿维菌素产生菌Bjbm0006菌株的诱变育种及发酵条件研究

摘要

阿维菌素产生菌(streptomycesavermitilis)Bjbm0006是通过基因置换的育种方法得到的一株工程菌，其发酵产物只有B组分，没有A组分。本文通过对Bjbm0006菌株的复壮，获得了一株发酵效价较高且稳定的分离株f-218。以f-218为出发菌株，探索了红霉素，链霉素抗性选育和紫外线-氯化锂、60Co-γ射线诱变、电融合和shuffling育种。结果发现：红霉素、链霉素抗性育种不仅不能得到产素较高的菌株，反而降低了效价。紫外线-氯化锂、60Co-γ射线诱变、电击法和shuffling处理后筛选到的菌株均能不同程度地提高试验菌株的产素能力。其中通过60Co-γ射线、电击法和shuffling诱变效果较好。分离到三株高产菌株10-9，25-b-4以及z-27，其中z-27发酵效价分别比出发菌株提高了167.19％。经传代试验，z-27遗传稳定性较好而且产素效价较高。 以z-27菌株为试验菌株进行了发酵培养基的研究，探索了不同碳源，不同氮源，前体和豆油等单因子对阿维菌素生物合成的影响。在单因子试验的基础上经L25(56)正交设计的筛选试验，筛选到一个发酵培养基的最佳配方。同时，对菌株z-27的装料量、温度等也做了研究，发现150毫升三角瓶中装料20ml；温度28.5℃条件下AVMB1a发酵效价最高。

目录

摘要

前言

1.阿维菌素概述

2.阿维菌素生产技术及规模

3.阿维菌素的发展前景

4.阿维菌素的诱变育种

材料与方法

1. 实验材料

1.1供试菌株

1.2培养基

1.3试剂

1.4实验仪器

实验方法

2.1培养条件

2.1.1斜面菌种培养条件

2.1.2种子培养基培养条件

2.1.3发酵培养基培养条件

2.2诱变与筛选方法

2.2.1斜面菌种的制备

2.2.2孢子悬液制备

2.2.3发酵后处理

2.3高产菌株的选育

2.3.1原始菌株发酵条件的确定

2.3.2原始菌株的复壮

2.3.3链霉素抗性育种

2.3.4紫外线-氯化锂复合诱变处理

2.3.5 60Co诱变处理

2.3.6电击法诱惑处理

2.3.7 shuffling方法诱育种

2.4发酵培养基的筛选

2.4.1碳源和氮源的筛选

2.4.2单因子试验

2.4.3正交试验

2.5其它物质对z-27菌株阿维菌素生物合成的影响

2.5.1前体物质对Bjbm0006阿维菌株阿维菌素生物合成的影响

2.5.2豆油对z-27菌株阿维菌素生物合成的影响

2.6摇瓶条件的优选

2.7测定方法

结果与分析

3.1原始菌株发酵条件的确定

3.1.1发酵温度的确定

3.1.2发酵时间的确定

3.1.3摇瓶发酵装料量的确定

3.2原始菌种的复壮

3.3阿维菌素产生菌f-218菌株的诱变育种

3.3.1链霉素抗性育种对f-218菌株的诱变结果

3.3.2紫外线对f-218菌株的诱变结果

3.3.360Co-γ射线对5-1-85诱变结果

3.3.4电击法对5-1-85诱变结果

3.3.5 shuffling对5-1-43的诱变效果

3.4 终筛结果

3.5培养基优选结果

3.5.1不同氮源对菌株z-27的阿维菌素合成的影响

3.5.2不同碳源对菌株z-27的阿维菌素合成的影响

3.5.3六种单因子对菌株z-27的阿维菌素合成的影响

3.5.4 L25(56)正交试验结果

3.5.5其它物质对菌株z-27的阿维菌素合成的影响

3.6 发酵条件对菌株z-27阿维菌菌素合成的影响

3.6.1装料量对z-27菌株阿维菌素合成的影响

3.6.2温度对z-27菌株阿维菌素合成的影响

3.6.3消毒前pH值对z-27菌株阿维菌素合成的影响

讨论

参考文献

致谢