具有良好抑菌性能的芽孢杆菌和乳酸菌的筛选及效价评估

摘要

本实验从断奶仔猪粪便中筛选具有抑菌作用的菌株，根据其生理特性进行复筛，然后与益生元及实验室已有的优良菌株进行复配，找出最佳的菌株组合，并应用到断奶仔猪，对其益生性能进行评价。
　　（1）从健康的断奶仔猪粪便中分离、纯化出乳酸菌6株和芽孢杆菌8株，以4株禽畜养殖中常见致病菌作为指示菌来评价它们的抑菌能力，发现乳酸菌中R1抑菌能力最好；芽孢杆菌中抑菌能力最好的是A6和A7。
　　（2）耐受性实验表明：芽孢杆菌A7耐酸能力和耐胆盐能力最好，在 pH2的LB液体培养基中培养24 h后存活率仍有30％，在含0.3%牛胆盐的培养基上生长良好；乳酸菌R1和 R3在 pH为3的环境处理3 h后存活率显著的高于其它4株乳酸菌（p＜0.05）），R1对于牛胆盐环境的耐受能力最强，存活率都要显著地高于另外的5株乳酸菌（p＜0.05）；药敏性试验表明，在10种常见的抗生素中，芽孢杆菌 A6和 A7仅仅对青霉素耐受，乳酸菌对10种抗生素的耐受情况差异比较大，但都对氯霉素、氨苄西林、先锋霉素V敏感，此外R1能够较好的耐受丁胺卡那霉素、庆大霉素、诺氟沙星和环丙沙星。
　　（3）采用Ⅲ型猪蛋白模拟仔猪肠道环境来评价菌株的粘附性，乳酸菌中 R1和芽孢杆菌 A6、 A7的粘附能力最强，粘附率分别为22.86±0.635%、25.00±1.129%、30.48±5.323%），显著地强于其它菌株（p＜0.05）。
　　（4）单糖复配实验发现，0.5%的甘露糖和1.0%的壳寡糖对 R1的生长促进作用最强，提升率分别为254.50%和238.20%；0.5%的低聚木糖对 A7的生长促进作用最强，提升率为129.47%。
　　（5）将 R1和 A7分别与 EM、 BS3进行组合搭配，检测对4株致病菌的生长抑制能力，发现R1和EM的复配组合的抑菌能力最强，R1和 A7的组合对4株致病菌也具有较强的生长抑制能力。
　　（6）分别采用对峙培养法和双层培养基法来探究 R1、 A7、BS3和 EM间的相互抑制情况，发现 R1和 EM都对 A7与 BS3的生长有着较强的抑制， A7和BS3间没有相互抑制，R1和 EM间也具有较弱的相互抑制能力。
　　（7）R1、 EM和 A7进行固态发酵， R1在37℃发酵48 h时活菌数最高，达4.9×109 cfu/g， A7在30℃发酵48 h后，活菌数可以达到3.7×1010 cfu/g；保存试验表明R1烘干后，在4℃环境保存4周时，存活率为71.99%，超过4周则活菌数迅速地下降，A7保存8周后活菌数没有下降。
　　（8）在42日龄的断奶仔猪日粮中分别添加 R1、R1和 A7混合菌、R1和 EM的混合菌饲喂28天后，结果发现在整个实验过程中，断奶仔猪的生长性能和腹泻率与对照组相比都不具有显著性地差异（p>0.05）；此外在整个实验过程中，除了在实验的后两周，R1、R1和EM的混菌这2个实验组的断奶仔猪血清中二胺氧化酶的含量要显著地抵于阳性对照组外（p<0.05），另外的血清生化指标都不具有显著性地差异（p>0.05）；最后，在第28天时的粪便微生物进行分析后，发现饲喂植物乳杆菌 R1、饲喂植物乳杆菌 R1和解淀粉芽孢杆菌 A7这2个实验组的粪便菌群的多样性指数（H）均要高于阳性对照组。

目录

声明

1前言

1.1畜牧养殖的现状

1.2益生菌和益生元的概念

1.3益生菌的作用机理

1.4益生菌在养殖业的应用

2实验材料与实验方法

2.1实验材料

2.2实验方法

2.3菌体的复配

2.4幼龄动物饲喂实验

3实验结果与数据

3.1具有良好抑菌性能菌株的分离、鉴定

3.2菌株的抗逆性评价

3.3菌株的复配

3.4断奶仔猪实验

4总结

4.1菌株的分离

4.2菌株的固态发酵

4.3菌株与寡糖的复配

4.4菌株间的复配

4.5对断奶仔猪生长性能、腹泻率和血清生化指标的影响

5展望

5.1 R1和A7在畜牧养殖领域的应用前景

5.2 R1和A7在食品医药领域的应用前景

参考文献

附录

致谢