柿单宁特征二聚体稳定性及其抑制3T3-L1细胞分化的活性形式探究

摘要

前期研究发现，柿单宁具有良好的抑制3T3-L1细胞成脂分化的能力，且柿单宁特征二聚体中A型连接ECG二聚体和A型连接ECGC二聚体是其主要有效成分，但是其在细胞模型中又极其不稳定。因此研究柿单宁特征二聚体A型连接ECG二聚体和A型连接ECGC二聚体在3T3-L1细胞体系中稳定性与其抑制3T3-L1细胞成脂分化的能力非常具有必要性。鉴于细胞体系复杂性，本研究首先研究了二聚体在细胞培养基体系中的稳定性及代谢产物。随后又研究了其在细胞体系中稳定性及其在细胞中分布。最后进行了两种A型连接的二聚体抑制3T3-L1成脂分化的结构形式探究。主要研究结果如下。
　　1.柿单宁特征二聚体在细胞培养基中稳定性
　　柿单宁特征四种特征二聚体稳定性B型连接EC二聚体＞A型连接EC二聚体＞A型连接ECG二聚体＞A型连接EGCG二聚体。伴随着四种二聚体在培养液中降解，均能产生一系列产物和H2O2，产生的H2O2量和代谢速率正相关。其中A型连接EC产生一种三聚体和两种同分异构。B型EC产生两种m/z665的同分异构。A型ECG产生没食子酸。A型EGCG产生没食子酸及分子离子峰为m/z469.7、m/z905.9及m/z452.8产物。
　　2.柿单宁特征二聚体在3T3-L1细胞体系中稳定性
　　柿单宁特征四种特征二聚体稳定性B型连接EC二聚体＞A型连接ECG二聚体＞A型EC二聚体＞A型连接EGCG二聚体。四种二聚体在培养液中降解均产生H2O2但是均少于在纯培养液中，产生的H2O2量和代谢速率正相关。在3T3-L1细胞中未发现任何二聚体及其产物。细胞膜上总酚A型连接ECG二聚体＞A型连接EC二聚体＞A型连接EGCG二聚体＞B型连接EC二聚体。说明二聚体抑制3T3-L1细胞成脂分化可能是通过与细胞膜结合完成。
　　3.两种A型连接的二聚体抑制3T3-L1成脂分化的结构形式探究
　　SOD，VC均能极大提高A型连接ECG二聚体和A型连接ECGC二聚体在细胞体系的稳定。VC可以显著提高A型连接ECG抑制3T3-L1细胞成脂分化效果。VC，SOD均能显著提高A型连接EGCG抑制3T3-L1细胞成脂分化效果。当A型连接ECG二聚体和A型连接EGCG二聚体预先和培养基孵育后，其抑制3T3-L1细胞成脂分化效果减弱。表明A型连接ECG二聚体和A型连接EGCG二聚体是以其本身而不是其氧化产物的形式抑制3T3-L1细胞成脂分化的。

目录

声明

摘要

英文缩略语表

第一章 前言

1．原花青素的结构

2 原花青素的稳定性以及代谢与生物利用率

2．1 原花青素在细胞体系稳定性

2．2 原花青素生物利用率、代谢

3 原花青素与信号传导关系

3．1 原花青素通过与生物体内信号蛋白互作发挥作用

3．2 原花青素通过与膜相互作用发挥生物活性

5 本课题的目的意义及研究内容

5．1 研究目的和意义

5．2 研究内容

第二章 柿单宁四种特征结构单元在纯细胞培养基中的稳定性研究

1 材料与方法

1．1 实验材料与仪器设备

1．2 实验方法

2 结果与分析

2．1 四种原花青素二聚体的降解速率分析

2．2 培养基体系H2O2的生成量

2．3 DMEM中二聚体降解产物分析

3 讨论

4 小结

第三章 柿单宁特征二聚体在3T3-L13细胞体系中的稳定性及其在细胞中的分布

1 材料与方法

1．1 实验材料与仪器设备

1．2 实验方法

2 结果与分析

2．1 细胞培养液中二聚体代谢速率分析

2．2 细胞体系H2O2

2．3 细胞体系中四种二聚体代谢产物分析

2．4 A型连接ECG二聚体和A型连接EGCG二聚体在细胞液中分布

2．5 细胞膜二聚体检测

3 讨论

4 小结

第四章 两种A型连接的二聚体抑制3T3-L1成脂分化的结构形式探究

1 材料与方法

1．1 实验材料与仪器设备

1．2 实验方法

2 结果与分析

2．1 SOD，VC和EDTA对几种二聚体在细胞体系稳定性的影响

2．2 抗氧化剂处理对A型EGCG和ECG抑制3T3-L1成脂分化能力的影响

2．3 自氧化对A型EGCG和ECG二聚体抑制3T3-L1成脂分化能力的影响

3 讨论

4 小结

第五章 结论与展望

参考文献

致谢