胶质瘤放射敏感性与ATM蛋白表达关系的实验研究

摘要

第一部分:不同放射敏感性胶质瘤中ATM蛋白、NF-κB及EGFR的表达及其相关性研究 目的:探讨ATM蛋白、NF-κB和EGFR在不同放射敏感性胶质瘤中的表达水平和相互关系及其与胶质瘤放射敏感性的相关关系。 方法:应用免疫组织化学SABC法检测了ATM蛋白、NF-κB及EGFR在11例髓母细胞瘤，12例室管膜瘤，17例少枝胶质细胞瘤，低级别(Ⅰ～Ⅱ级)及高级别星形细胞瘤(Ⅲ～Ⅳ级，其中11例多形性胶质母细胞瘤)各21例和5例正常脑组织中的表达。 结果:正常脑组织中均未见阳性表达；不同组织类型的胶质瘤中三者均具有不同的阳性表达率和平均光密度值，ATM蛋白、NF-κB和EGFR的阳性表达率依次为32.9％，48.8％和51.2％；三者同时阳性和阴性表达者分别为25.6％、36.5％；ATM蛋白在多形性胶质母细胞瘤表达率最高，在髓母细胞瘤和低级别星形细胞瘤表达较低，髓母细胞瘤中平均光密度值与其他各组均有显著性差异(p＜0.05)，在低及高级别星形细胞瘤间平均光密度值有显著性差异(p＜0.05)。NF-κB和EGFR表达率在髓母细胞瘤、室管膜瘤、少枝胶质细胞瘤、低及高级别星形细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤中呈依次上升趋势。 结论:ATM蛋白与NF-κB及EGFR存在相关关系，它们的表达水平与胶质瘤的不同放射敏感性具有相关性。 第二部分:ATM蛋白表达及细胞增殖活性与星形细胞瘤放射敏感性关系的实验研究 目的:探讨星形细胞瘤中ATM蛋白表达及细胞增殖活性与放射敏感性的相关性，为临床治疗提供参考。 方法:采用流式细胞仪检测了22例星形细胞瘤中ATM蛋白的表达，并用四唑盐比色法(MTT)检测原代培养星形细胞瘤以60Co2Gy放射剂量照射后的存活分数(SF2)，以探讨ATM蛋白的表达量与星形细胞瘤放射敏感性的相关性；同时观察了5例原代培养的多形性胶质母细胞瘤细胞的形态学变化并绘制生长曲线，采用免疫细胞化学方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达，以明确星形细胞瘤增殖活性与放射敏感性的相关关系。 结果:原代培养的星形细胞瘤细胞形态多样；SF2平均值为0.417±0.176(0.162～0.735)，在胶质母细胞瘤与星形细胞瘤Ⅱ、Ⅲ级间存在明显差异(p＜0.05)；ATM蛋白表达水平随星形细胞瘤恶性程度的增高而增加，在高、低级别星形细胞瘤间差异有显著性(p＜0.05)；直线相关与回归分析显示：ATM蛋白表达水平与SF2呈显著正相关(r=0.857，p＜0.05)；5例原代培养的多形性胶质母细胞瘤细胞生长曲线和增殖活性各不相同，PCNA标记指数与SF2的相关系数r为0.628(p＞0.05)。 结论:ATM蛋白的表达水平与星形细胞瘤放射敏感性密切相关，放射敏感性与PCNA指数之间无明显相关性；星形细胞瘤中存在不同放射敏感性的细胞群，放射治疗应体现个体化原则。 第三部分:多形性胶质母细胞瘤放射前后ATM蛋白的表达及ATM/PI3-K区基因突变的检测 目的:探讨多形性胶质母细胞瘤(GBM)细胞辐射前后ATM蛋白表达量的变化及ATM/PI3-K区基因突变的情况。 方法:采用流式细胞仪技术检测U251细胞系及5例原代培养的多形性胶质母细胞瘤细胞以2Gy射线剂量照射前后ATM蛋白表达量的变化，以逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术和PCR产物直接测序方法，对多形性胶质母细胞瘤细胞中ATM/PI3-K区关键区域进行突变检测。 结果:U251细胞系中60Co照射前后ATM蛋白量均明显低于原代培养GBM的ATM蛋白量，U251和原代GBM细胞ATM蛋白表达量有显著差异(p＜0.05)；U251细胞系及原代培养GBM细胞60Co照射后的ATM表达虽有所升高，但经统计学分析无显著性差异(p＞0.05)。所测U251细胞系及5例原代培养的多形性胶质母细胞瘤细胞中ATM/PI3-K区序列中未检测到有基因突变。 结论:ATM蛋白表达水平不能完全反映ATM蛋白激酶的活性，多形性胶质母细胞瘤的放射抗拒可能与ATM/PI3-K区基因突变不相关。

目录

前言

第一部分不同放射敏感性胶质瘤中ATM蛋白、NF-κB及EGFR的表达及其相关性研究

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第二部分ATM蛋白表达及细胞增殖活性与星形细胞瘤放射敏感性关系的实验研究

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第三部分多形性胶质母细胞瘤放射前后ATM蛋白的表达及ATM/PI3-K区基因突变的检测

材料与方法

结果

讨论

参考文献

附表

附图1

附图2

附图3

小结

综述:胶质瘤放射敏感性相关基因的研究进展

缩略词表

个人简历

在读期间发表的文章及参编著作

致谢