Slit-siRNA玻璃体腔注射对急慢性高眼压大鼠模型视网膜神经节细胞凋亡的影响

摘要

目的：建立稳定的SD大鼠的急性和慢性青光眼模型，检测大鼠视网膜上BDNF和slit2mRNA的表达以及RGC凋亡的状况，利用RNAi干扰技术下调slit2mRNA的表达，以期通过上调BDNF的途径降低RGC的凋亡达到视神经保护的目的。
　　 方法：①采用大鼠眼前房灌注生理盐水和不同大鼠视神经夹持时间来选择前房稳定的急性高眼压大鼠模型作为视神经保护的研究；②巩膜表面血管结扎联合角巩缘血管网电凝制作慢性高眼压大鼠模型；③造模成功后摘除眼球，固定包埋后切成5-μm的视网膜切片。免疫组织化学SP法检测大鼠视网膜上的BDNF的表达和核酸分子原位杂交法检测slit2mRNA在大鼠视网膜上的表达；④slit2SiRNA模型鼠的右眼玻璃体腔内，取大鼠眼球固定切片进行BDNF的免疫组化检查、TUNEL检查RGC的凋亡以及核酸分子原位杂交检测slit2mRNA的表达。
　　 结果：①选用模型是选用20秒(s)的大鼠视神经夹持模型作为视神经保护研究的模型，不仅可以达到生理盐水前房灌注的急性高眼压模型的：RGC：凋亡水平，而且保持了眼球的完整性；②巩膜表面血管结扎联合角巩缘血管网电凝可以制作稳定的大鼠慢性高眼压模型。③BDNF的免疫染色见于节细胞层、内网层、内核层和视锥视杆层，其中视网膜节细胞层(GCL)可见大量胞浆深染的BDNF阳性细胞。Slit2mRNA在视网膜RG(：层和内核层均有表达，在急性和慢性高眼压模型的视网膜RG(：层上的表达是上调的；④急性高眼压模型中和慢性高眼压模型中运用各浓度的slit：mRNA玻璃体腔注射后视网膜上slit2mRNA下调，同时BDNF的表达上调，RG(：的凋亡减少，但没有显著性意义。而慢性高眼压模型中表现更为明显，在200nmol组中表现最为明显，并与其他组别有显著性差异.
　　 结论：在大鼠高眼压模型中，Slit2siRNA注入玻璃体腔中可通过下调slit2mRNA在视网膜节细胞层的表达，从而上调BDNF途径减少RGCs的凋亡，以达到保护视网膜视神经的作用，在慢性高眼压模型中更为有效。