癌基因Wip1在UVC诱导的胶质瘤细胞损伤中的作用研究

摘要

第一部分p53-Wip1基因在胶质瘤细胞UVC诱导的细胞损伤反应中的作用
　　目的：利用紫外线C(UltravioletC,UVC)处理U251(突变型p53细胞)和U87MG细胞(野生型p53细胞),观察其对细胞增殖的影响,并测定两种细胞p53、bcl2、Wip1表达的变化,探讨其与胶质瘤细胞增殖变化间的关系,探究其潜在机制。
　　方法：利用0、1、5、25、50、100J/m2UVC处理U87MG和U251细胞,经CCK-8法观察UVC对两株细胞增殖能力的影响。以50J/m2UVC处理细胞,蛋白免疫印迹试验(Westernblotassay)测定不同时间点两株细胞内p53、bcl2、Wip1蛋白表达变化。数据用SPSS10.0软件进行统计学分析。
　　结果：UVC可降低胶质瘤细胞的增殖能力。UVC剂量为0~5J/m2时,U251和U87MG增殖率变化无差异;当其剂量为25~100J/m2时,UVC能够诱导U251细胞发生更严重的细胞损伤反应。50J/m2UVC处理72h后U251细胞较U87MG细胞的增殖能力下降更明显,第72h后U251细胞的增殖率为(36.13±1.13)％,而U87MG为(80.02±5.46)%。50J/m2UVC照射胶质瘤细胞后,p53、bcl2和Wip1蛋白表达水平随时间变化发生波动。在U251和U87MG细胞内,p53蛋白在24小时内持续上调,bcl2蛋白在24小时内也持续上调。U251内Wip1蛋白持续上调;U87MG内Wip1蛋白在紫外线照射后8小时内下调,到第24小时反跳性上调。
　　结论：UVC更容易诱导U251细胞发生损伤,U87MG能够抵抗UVC对细胞的损伤,这种现象与p53蛋白功能存在一定相关性,同时,Wip1在UVC诱导的细胞损伤中也可能发挥了一定作用。
　　第二部分Wip1抑制剂协同UVC抑制胶质瘤细胞体外恶性行为的研究
　　目的：利用Wip1抑制剂CCT007093处理U251和U87MG细胞,观察其对细胞增殖的影响,联合CCT007093及UVC处理胶质瘤细胞,测定两种细胞内p53、Wip1、p38、p-p38蛋白以及Wip1mRNA表达的变化,探讨其与细胞增殖、迁移和侵袭能力之间的关系及机制。
　　方法：利用0、5、25、50、100、200μMCCT007093处理U87MG和U251细胞,经CCK-8法测定CCT007093对两株细胞增殖的影响。单纯使用50μMCCT007093(或联合UVC)处理胶质瘤细胞。Westernblot测定细胞内p53、Wip1、p38、p-p38蛋白表达变化。实时定量聚合酶链反应(realtimequantityPCR,RT-Q-PCR)测定Wip1mRNA水平。划痕迁移试验(Scratchmigrationassay)测定细胞迁移能力,Transwell侵袭试验(Transwellinvasionassay,Transwell)检测细胞侵袭能力。数据用SPSS10.0软件进行统计学分析。
　　结果：CCT007093可有效降低胶质瘤细胞(特别是U87MG)的增殖能力。以50μMCCT007093处理经50J/m2UVC照射的胶质瘤细胞,U251及U87MG细胞内p53蛋白在第8小时达到高峰,第24小时明显下调;U251细胞内Wip1蛋白上调,U87MG细胞内Wip1蛋白持续下调;两株细胞中,p38及p-p38均逐渐下调。无论是单一因素还是联合运用UVC和CCT007093,U251细胞中Wip1mRNA表达下调,U87MG内Wip1的mRNA在8h内均明显上调。在单纯UVC和单纯CCT处理组中,处理后第24hU87MG细胞内Wip1mRNA水平较第8h均明显降低;而联合UVC和CCT处理时,其水平较第8h高,为对照组的(383.11±39.63)%。划痕迁移试验和Transwell侵袭试验显示,CCT007093能够协同UVC抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭能力。
　　结论：Wip1抑制剂CCT007093能够下调UVC诱导的野生型p53胶质瘤细胞Wip1蛋白过表达,协同UVC抑制胶质瘤细胞迁移、侵袭和增殖能力。

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前言

第一部分p53-Wip1基因在胶质瘤细胞UVC诱导的细胞损伤反应中的作用

1 材料和方法

1.1 材料

1.2 方法

2 结果

2.1 UVC对胶质瘤细胞增殖活性的影响

2.4 UVC对胶质瘤细胞p53-Wip1、bcl2蛋白表达的影响

3 讨论

4 结论

参考文献

第二部分Wip1抑制剂协同UVC抑制胶质瘤细胞体外恶性行为的研究

1 材料和方法

1.1 材料

1.2 方法

2 结果

2.1 Wip1抑制剂CCT007093对胶质瘤细胞增殖活性的影响

2.2 Wip1抑制剂对胶质瘤细胞Wip1、p-p38、p38、p53蛋白表达的影响

2.3 胶质瘤细胞Wip1 mRNA表达的影响

2.4 Wip1抑制剂CCT007093对胶质瘤细胞迁移能力的影响

2.5 Wip1抑制剂CCT007093对胶质瘤细胞侵袭能力的影响

3 讨论

4 结论

参考文献

综述

缩略词表

致谢