一种基于适配体的方法快速检测宫颈癌标志物P16INK4A

摘要

目的：对宫颈癌的筛查有助于疾病早期发现、早期诊断、早期治疗。为此我们提出了一种可用于宫颈癌筛查的检测方法，该方法可快速检测宫颈癌标志物P16INK4A。
　　方法：构建重组质粒p16ink4a-pET28a，在大肠杆菌中表达P16INK4A，利用亲和层析纯化P16INK4A，最后利用western blot验证P16INK4A。以纯化的重组蛋白P16INK4A作靶蛋白，利用SELEX技术筛选其特异性适配体，通过分析亲和力最终选出一条高亲和力、高特异性的适配体。枸橼酸钠还原法制备13nm纳米金颗粒并表征。建立基于纳米金和适配体的分析方法，并对其进行方法学的考察。
　　结果：重组蛋白P16INK4A在大肠杆菌中成功表达，亲和层析制备了高纯度的重组蛋白并鉴定为正确。筛选出一条Kd值为5.624nM的高亲和力的适配体并验证可以和重组蛋白结合。制备出分散良好、大小均一13nm纳米金。建立了基于纳米金和适配体的分析方法。该方法的检测限是4.52nM，定量限是12.5nM，批次间和批次内变异系数均不超过10％，回收率在96.03％-107.04％之间。
　　结论：成功筛选出一条抗重组P16INK4A的高亲和力、高特异性的适配体，利用该适配体和纳米金建立了一种可快速检测宫颈癌标志物P16INK4A分析方法，该方法具有较好的准确度和精密度。

目录

封面

声明

目录

中文摘要

英文摘要

前言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

综述

致谢