轮状病毒LLR减毒活疫苗对SPF兔和无菌兔的致病性和免疫原性研究及其VP6基因的表达

摘要

轮状病毒(RotavirusRV)是引起儿童重症腹泻的最常见病原之一。据估计，仅2004年轮状病毒感染引起约527000死亡病例，主要发生在发展中国家。严重地威胁到儿童的健康，由于目前尚无治疗轮状病毒的特效药，因此预防尤为重要。当前全球范围内批准上市的疫苗有三种：单价人减毒活疫苗(Rotarix)、五价牛-人重配株疫苗(RotaTeq)和单价羊株减毒活疫苗(LLR)。然而，因大多数轮状病毒疫苗是不同重配疫苗株混合而成的多价疫苗，因此，其研制、生产和临床评价中各型毒株的特异性体内外定量和定性检测是疫苗质量控制的关键。本文运用SPF兔和无菌兔来研究轮状病毒疫苗免疫和感染情况，为新型轮状病毒疫苗的临床评价奠定基础。 第一部分：轮状病毒LLR减毒活疫苗对SPF兔和无菌兔的致病性和免疫原性研究第一部分实验选用SPF级兔和无菌兔为动物模型，通过免疫接种单价羊株轮状病毒减毒活疫苗，研究检测免疫前后有关指标的变化：用ELISA检测血清中IgA和IgG的变化来评价接种疫苗后动物的体液免疫；用流式细胞仪检测外周血CD4/CD8比值的变异来研究接种疫苗后动物细胞免疫的变化；通过检测动物的便样，观察是否出现腹泻症状和排出病毒和通过免疫组化观察小肠中是否有轮状病毒来阐明LLR是否在小肠繁殖-感染小肠。结果表明：LLR疫苗可以诱导SPF和无菌兔产生包括体液免疫和细胞免疫在内的RV特异性免疫应答；可在小肠复制但不致病。 第二部分：轮状病毒VP6基因的表达第二部分实验研究了羊株轮状病毒VP6基因在大肠杆菌中的表达。通过用Trizol法从羊株轮状病毒减毒活疫苗中提取RNA病毒，RT-PCR扩增轮状病毒第6节段基因全长，与pMD18-T载体连接、转化、筛选阳性克隆。将重组质粒进行PCR扩增VP6基因，再与载体pET-32a连接构建pET-32a-vp6表达载体，测序结果正确，VP6基因在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达，Western-blot鉴定证明了表达产物为RVVP6蛋白。获得的VP6蛋白抗原用于制备检测血清中轮状病毒IgA的ELISA试剂盒，为将来有效地评价轮状病毒疫苗的临床效果打下基础。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:英文缩略词表

前言

实验一 轮状病毒LLR减毒活疫苗对SPF兔和无菌兔的致病性和免疫原性研究

材料和方法

结果

3.讨论

实验二 轮状病毒VP6基因的表达

材料与方法

结果

5讨论

参考文献

论文总结

轮状病毒疫苗的发展现状

在读期间发表及待发表的文章

致谢