声明
1 绪论
1.1 乳腺癌概述
1.2 miRNA概述
1.2.1 miRNA的发现
1.2.2 miRNA的生物合成
1.2.3 miRNA在肿瘤中的作用
1.2.4 miRNA与乳腺癌的诊断和治疗
1.3 miR-127-5p与肿瘤
1.4 谷氨酰胺代谢与肿瘤
1.5 MDH1与肿瘤
1.6 主要的实验技术
1.6.1 流式细胞荧光分选技术
1.6.2 Transwell实验
1.6.3 双荧光素酶实验
1.7 本文研究内容和研究目的
2 实验材料与实验方法
2.1 实验常用仪器
2.2 主要实验试剂和配方
2.2.1 实验常用试剂
2.2.2 主要实验配方
2.3 实验材料
2.4 实验方法和步骤
2.4.1 组织中总RNA的提取、反转录和实时荧光定量PCR分析
2.4.2 细胞培养及转染实验
2.4.3 细胞增殖检测
2.4.4 细胞凋亡检测
2.4.5细胞侵袭检测（Transwell assay）
2.4.6 预测miR-127-5p的靶基因序列
2.4.7 野生型和突变型MDH1-3'UTR荧光素酶载体的构建
2.4.8 双荧光素酶报告基因检测
2.4.9 蛋白质免疫印迹
2.4.10 统计分析
3 实验结果与分析
3.1 miR-127-5p在人乳腺癌组织和细胞中表达下调
3.2 miR-127-5p抑制人乳腺癌细胞的生物学功能
3.2.1 miR-127-5p对细胞增殖的影响
3.2.2 miR-127-5p对细胞凋亡的影响
3.2.3 miR-127-5p对细胞侵袭的影响
3.3 预测miR-127-5p与MDH1-3' UTR存在相互作用并构建野生型和突变型MDH1-3' UTR质粒
3.4 蛋白水平上验证miR-127-5p可以下调MDH1的表达
3.5 MDH1在人乳腺癌组织和细胞中表达上调
3.6 在乳腺癌组织中miR-127-5p和MDH1的表达呈负相关
3.7 分子水平验证MDH1是miR-127-5p的直接靶基因
3.8 miR-127-5p影响乳腺癌细胞的谷氨酰胺代谢和氧化还原稳态
3.9 MDH1参与miR-127-5p对乳腺癌细胞功能的抑制作用
4 总结与讨论
5 展望
致谢
参考文献
附录 主要英文缩略词表
