L.plantum和E.coli细胞壁肽聚糖缓释微球对小鼠肠道菌群及机体免疫调节作用的研究

摘要

肽聚糖的生物活性越来越受到人们的关注，本课题的目的是通过比较革兰氏阳性细菌（植物乳杆菌为代表）和革兰氏阴性细菌（大肠杆菌为代表）细胞壁肽聚糖对肠道菌群组成和机体免疫调节活性的影响，为肽聚糖作为潜在疫苗的开发提供前期的数据支持。
　　本研究通过三氯乙酸法分离了大肠杆菌细胞壁肽聚糖，得到大肠杆菌肽聚糖的提取率为(11.2±1.35％)。并以壳聚糖作为壁材，通过化学交联法制备了大肠杆菌肽聚糖(EPG)微球，通过扫描电镜观察证明EPG微球成球性良好，该微球载药量为(43.51±4.66)g/100g，包封率为(91.20±1.82)％。肽聚糖微球对小鼠肠道菌群及免疫功能的调节作用。研究数据显示:肽聚糖微球组小鼠肠道中的有益菌乳酸杆菌、双歧杆菌显著高于生理盐水组(P＜0.01)，条件致病菌肠杆菌、肠球菌显著低于生理盐水组(P＜0.01)，血清中溶菌酶含量、IgG含量、IL-2含量、肠粘膜中SIgA的含量、肝脏指数、脾脏指数均显著高于生理盐水组(P＜0.01)。肽聚糖微球对大肠杆菌感染小鼠模型的保护作用。结果显示，肽聚糖微球组小鼠肠道菌群中有益菌的数量显著高于生理盐水组(P＜0.01)，条件致病菌数量显著低于生理盐水组(P＜0.01)，血清中IgG含量、IL-10含量、肠粘膜中的SIgA的含量显著高于生理盐水组(P＜0.05)。IL-6的含量显著低于生理盐水组(P＜0.01)。
　　本研究结果表明，大肠杆菌肽聚糖微球成球性良好、性能稳定，两种肽聚糖微球具有良好的调节肠道菌群及机体免疫功能的能力。可以有效增强机体免疫能力，对大肠杆菌感染小鼠引起的小鼠肠道菌群失调、肠道免疫功能紊乱具有有效的且持久的预防保护效果，两种肽聚糖在保护效果上无显著性差异，初步显示肽聚糖在保护效果上具有非特异性，为肽聚糖作为疫苗的进一步开发奠定基础。

目录

摘要

第1章 前言

1．1 肠道菌群与健康的关系

1．1．1 肠道菌群概述

1．1．2 肠道菌群与宿主健康

1．2 肠道菌群失调的常见控制措施

1．2．1 抗生素治疗

1．2．2 益生菌治疗

1．2．3 益生元治疗

1．2．4 多糖对肠道菌群的影响

1．3 细菌肽聚糖的研究及应用

1．3．1 细菌肽聚糖概述

1．3．2 细菌肽聚糖的免疫效果研究进展

1．3．3 细菌肽聚糖应用研究进展

1．3．4 肽聚糖作为肠道菌群和机体免疫调节剂的可行性分析

1．4 本实验室的前期研究工作基础

1．5 本课题研究的立体依据，研究内容及目的意义

1．5．1 立体依据及目的意义

1．5．2 研究内容概述

第2章 大肠杆菌细胞壁肽聚糖分离及微球的研制

2．1 实验材料

2．1．1 菌种

2．1．2 培养基

2．1．3 实验试剂

2．1．4 实验仪器

2．2 大肠杆菌细胞壁肽聚糖分离

2．2．1 菌种的活化

2．2．2 三氯乙酸法提取肽聚糖

2．2．3 溶菌酶试验

2．3 大肠杆菌细胞壁肽聚糖缓释微球制备

2．4 大肠杆菌细胞壁肽聚糖缓释微球结构表征及性能检测

2．4．1 EPG微球扫描电镜观察

2．4．2 红外光谱分析

2．4．3 热重分析

2．4．4 肽聚糖-壳聚糖缓释微球载药量和包封率检测

2．5 结果与讨论

2．5．1 溶解酶实验结果

2．5．2 扫描电镜观察EPG微球，CS微球形态

2．5．3 傅立叶红外光谱分析(FTIR)

2．5．4 热重分析

2．5．5 载药量和包封率

2．6 本章小结

第3章 EPG微球，LPG微球对小鼠肠道菌群和机体免疫的调节作用

3．1 实验材料

3．1．1 实验动物

3．1．2 实验材料及试剂

3．1．3 实验仪器和设备

3．2 实验方法

3．2．1 动物分组和剂量设置

3．2．2 肠道菌群检测

3．2．3 血清中溶菌酶含量检测

3．2．4 血清中IgG，IL-2含量检测

3．2．5 肠粘膜中SIgA含量检测

3．2．6 免疫器官指数的测定

3．2．7 统计学分析

3．3 结果分析

3．3．1 小鼠表观特征观察

3．3．2 各组小鼠肠道菌群变化

3．3．3 各组小鼠血清中溶解酶含量变化

3．3．4 各组小鼠免疫器官指数的变化

3．3．5 各组小鼠IgG，IL-2，SIgA含量的变化

3．4 讨论

3．4．1 小鼠免疫器官测定

3．4．2 各项检测指标的分析

第4章 肽聚糖缓释微球对大肠杆菌感染小鼠的保护效果的研究

4．1 实验材料

4．1．1 实验动物

4．1．2 实验材料及试剂

4．1．3 实验仪器和设备

4．2 试验方法

4．2．1 大肠杆菌致小鼠肠道菌群失调模型建立

4．2．2 缓释微球对肠道菌群失调小鼠保护效果评价

4．3 实验结果讨论

4．3．1 小鼠表观特征观察

4．3．2 大肠杆菌感染后各组肠道菌群的含量的测定

4．3．3 大肠杆菌感染后不同时间IgG、IL-6、IL-10含量的测定

4．3．4 大肠杆菌感染后不同时间肠粘膜SIgA的测定

4．3．5 各组小鼠小肠病理学变化

4．4 讨论

4．4．1 大肠杆菌感染后小鼠肠道菌群数量变化分析

4．4．2 大肠杆菌感染后不同时间IgG，IL-6，IL-10含量变化分析

第5章 结论

第6章 本论文的主要创新点及展望

6．1 创新点

6．2 展望

参考文献

致谢

攻读硕士期间发表的论文

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