德氏乳杆菌保加利亚亚种双组分信号转导蛋白HPK1和RR1的功能分析

摘要

德氏乳杆菌保加利亚亚种（Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus）以其优良的发酵特性，在世界上广泛应用于各种发酵乳的生产，是一种具有很高经济价值的乳酸菌。尽管研究者对其进行了大量研究，但主要集中在发酵性能和应用方面的研究，而对该菌的代谢机制等方面研究甚少。
　　双组分信号系统是细菌中一种重要的调控机制，参与调控 pH变化、趋化性、孢子形成、细胞分裂、生物膜形成等多种生理生化过程以适应环境的变化。该系统由组氨酸蛋白激酶和应答调节蛋白两部分组成。近年来，研究者发现某些乳酸菌中存在着一些双组分信号系统，参与乳酸菌的耐酸性、粘附和定殖能力、细菌素合成等生理功能的调控。
　　本论文以德氏乳杆菌保加利亚亚种CH3为实验材料，对该菌的双组分系统HPK1/RR1进行功能分析，旨在揭示其在耐酸和粘附调节中的作用。本研究通过构建自杀性载体pUC18-rr1-EM-1和pUC18-hpk1-EM-1，分别转化到野生型菌株中，筛选获得了hpk1和rr1的突变体CH3-H1和CH3-R1，并构建了相应的互补菌株CH3-H1C和CH3-R1C。对上述菌株与野生型菌株，进行生长速度、细菌形态、耐酸能力、生物膜形成能力的比较分析。结果发现，突变体生长速度明显低于野生型菌株；同时突变体耐酸能力下降，并且生物膜形成能力也降低。以上结果表明， HPK1/RR1是一个多效调控系统，可参与细菌耐酸能力、粘附能力和生长能力的调节。

目录

德氏乳杆菌保加利亚亚种双组分信号转导蛋白HPK1和RR1的功能分析

德氏乳杆菌保加利亚亚种双组分信号转导蛋白HPK1和RR1的功能分析

FUNCTIONAL ANALYSIS OF TWO COMPONENT SIGNAL TRANSDUCTION PROTEINS HPK1 AND RR1 IN LACTOBACILLUS DELBRUECKII SUBSP. BULGARICUS

摘要

Abstract

第1章 绪 论

1.1 立题背景

1.2 双组分信号转导系统

1.3 乳酸菌中双组分信号转导系统

1.4 突变体的构建

1.5 本课题研究的目的及意义

1.6 本课题主要研究内容

第2章 材料和方法

2.1 材料及仪器

2.2 实验方法

第3章 突变体及互补体构建

3.1 不同抗生素筛选浓度确定

3.2 自杀性重组质粒pUC18-rr1和pUC18-hpk1构建

3.3 重组质粒pUC18-rr1-EM-1、pUC18-rr1-EM-2、pUC18-hpk1-EM-1 和pUC18-hpk1-EM-2构建

3.4 突变体筛选

3.5 互补体筛选

3.6 本章小结

第4章 功能分析

4.1 德氏乳杆菌保加利亚亚种CH3与突变体CH3-H1、CH3-R1生长曲线差异分析

4.2 菌体形态差异分析

4.3 耐酸功能分析

4.4 粘附功能分析

4.5 本章小结

结论

参考文献

攻读硕士学位期间发表的论文

哈尔滨工业大学硕士学位论文原创性声明

致谢