副干酪乳杆菌副干酪乳杆菌亚种X12对结肠癌HT-29细胞周期的影响

摘要

乳酸菌是一种存在于人体内的益生菌。本文以前期筛选的具有较好抗肿瘤活性的副干酪乳杆菌副干酪乳杆菌亚种X12(L.paracasei subp.paracasei X12)为研究对象,探讨其对结肠癌细胞HT-29细胞周期的影响旨在发现乳酸菌抗结肠癌作用的关键靶点及调控机制,为乳酸菌的进一步开发应用提供理论依据。
　　本课题以结肠癌细胞系HT-29为体外研究对象,首先研究副干酪乳杆菌副干酪乳杆菌亚种X12对HT-29细胞周期的阻滞作用,随后通过检测细胞周期的正向调控因子,即细胞周期素cyclin D1、cyclin E1;以及细胞周期的负向调控因子p21、p16、p27来明确参与副干酪乳杆菌副干酪乳杆菌亚种X12阻断结肠癌HT-29细胞周期的具体因子;最后以上游调控信号通路mTOR为核心,初步阐明副干酪乳杆菌副干酪乳杆菌亚种X12对结肠癌HT-29细胞周期调控的信号途径。
　　采用流式细胞术检测不同感染系数(10、50、100)的副干酪乳杆菌副干酪乳杆菌亚种X12对结肠癌细胞周期的影响,结果显示作用12h后细胞周期没有显著性变化,当作用时间增加到24h和48h后,结果显示G1增加而S期减少,表明副干酪乳杆菌副干酪乳杆菌亚种X12可以将HT-29细胞周期阻滞在G1期。
　　采用RT-PCR技术检测副干酪乳杆菌副干酪乳杆菌亚种X12对cyclin D1、cyclin E1,p21、p16、p27基因水平表达的影响。结果显示,副干酪乳杆菌副干酪乳杆菌亚种X12可下调cyclin D1 mRNA、cyclin E1 mRNA、p27mRNA的表达,但是对p21mRNA、p16mRNA基因水平的表达没有显著性作用。采用免疫荧光和流式免疫荧光技术检测副干酪乳杆菌副干酪乳杆菌亚种X12对cyclin D1、p27蛋白表达的影响,结果显示其可以下调cyclin D1,上调p27蛋白的表达。
　　采用RT-PCR技术检测副干酪乳杆菌副干酪乳杆菌亚种X12对mTOR信号通路的影响,结果显示其可以抑制mTOR基因的表达,促进下游调控因子4EBP1基因的表达,但是对P70S6K基因没有显著性影响,采用免疫荧光技术检测副干酪乳杆菌副干酪乳杆菌亚种X12对p-mTOR蛋白表达的影响,结果显示其可以抑制p-mTOR蛋白的表达。
　　综上,本研究结果表明副干酪乳杆菌副干酪乳杆菌亚种X12能通过抑制cyclin D1和cyclin E1,促进p27的表达来阻断结肠癌细胞HT-29细胞周期于G1期,上述调控作用与mTOR/4EBP1信号途径有关。

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第1章 绪 论

1.1本课题的研究背景及目的和意义

1.2 细胞周期

1.3 mTOR信号通路

1.4益生菌抗结肠癌作用及机制研究进展

1.5 本课题主要研究内容

第2章 材料和方法

2.1材料及仪器

2.2 实验方法

第3章 副干酪乳杆菌副干酪乳杆菌亚种X12对HT-29细胞周期的影响

3.1副干酪乳杆菌副干酪乳杆菌亚种X12形态学观察

3.2副干酪乳杆菌副干酪乳杆菌亚种X12作用HT-29细胞形态学

3.3 副干酪乳杆菌副干酪乳杆菌亚种X12对HT-29细胞周期的影响

3.4 本章小结

第4章 副干酪乳杆菌副干酪乳杆菌亚种X12对HT-29细胞周期影响机理研究

4.1 副干酪乳杆菌副干酪乳杆菌亚种X12对细胞周期调节因子表达的影响

4.2 副干酪乳杆菌副干酪乳杆菌亚种X12对mTOR信号通路的影响

4.3 本章小结

结论

参考文献

缩略词表

攻读硕士学位期间发表的论文及其他成果

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