防控产毒真菌的深海细菌代谢产物研究

摘要

在全球气候变暖、干旱等因素的影响下，食用和饲用农产品受真菌毒素污染日趋严重，近年来世界各地对产毒真菌的报道也日渐增多。海洋是生物资源的一大宝库，科研人员已从海洋微生物代谢产物中发现结构新颖，具有丰富的抗菌机制的生物活性物质，既可制备各种生物农药，又可制备拮抗菌剂，深海细菌是一类极具研究价值的海洋微生物，其代谢产物在防控产毒真菌的研究上有巨大应用前景。
　　以筛选出防控产毒真菌的高活性菌株，获得高效低毒的发酵产物的喷雾干燥或冷冻干燥剂型为目的展开本次实验。
　　本研究以实验室前期采用可视化平板法初筛得到的139株南大西洋深海细菌为研究对象，采用tip-culture方法筛选能高效抑制镰刀菌，寄生曲霉NFRI-95菌丝体生长和黄曲霉毒素产生的深海细菌。结果显示，有38株深海细菌能高效抑制镰刀菌菌丝体生长；8株深海细菌能高效抑制寄生曲霉NFRI-95丝体生长的；23株深海细菌能高效抑制黄曲霉毒素产生。其中16-2T、15-3T、12-80-1M、16-40-11F、3-2T、21-40-5F等5株菌对寄生曲霉NFRI-95和小麦镰刀菌均表现出高效抑菌抑毒能力。
　　选取18株复筛得到的高活性菌株，将其发酵液通过喷雾干燥、冷冻干燥两种工艺制得18种喷雾干燥粉末样品和7种冷冻干燥粉末样品，采用tip-culture法检测其对寄生曲霉NFRI-95的抑菌抑毒活性，发现17种样品与其发酵液抑菌抑毒活性一致，喷雾干燥粉末样品13-6T、8-5E4、4-7E4、FA13、9-9E和冷冻干燥粉末样品4-7E4、12-2E4、FA13、ZL4对寄生曲霉NFRI-95菌丝生长和产黄曲霉毒素的IC50值均低于对照药剂双乙酸钠的IC50值，抑菌抑毒活性更强。
　　为评估其应用价值，本实验在高活性的干燥粉末样品的生物安全性方面展开研究，检测全部喷雾干燥和冷冻干燥样品对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、产气肠杆菌、枯草芽孢肝菌、白色念珠菌和酿酒酵母等5种常见菌的抑菌活性，9种喷雾干燥样品的血液毒性和细胞毒性，结果显示全部样品对5种常见菌均无抑制作用；喷雾干燥样品ZL4、MM6、MHE12较对照药品双乙酸钠血液毒性更低；喷雾干燥粉末样品FA13、9-9E、ZL4、4-7E4、FF3、8-5E4、12-2E4、ZC4H、13-6T较对照药剂双乙酸钠对人肺成纤维细胞HFL1，人肝正常细胞L-02细胞毒性更低。
　　结果表明深海细菌的代谢产物在防控产毒真菌方面具有很大潜力。

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第1章 绪 论

1.1 课题背景

1.2 生物防治产毒真菌的研究现状

1.3 海洋细菌代谢产物抑制产毒真菌活性物质结构的研究现状

1.4 课题的来源、目的及内容

第2章 产胞外抗产毒真菌活性代谢产物的深海细菌筛选

2.1 引言

2.2 材料

2.3 实验方法

2.4 结果

2.5 讨论

2.6 本章小结

第3章 发酵产物不同剂型的制备及其对抑菌抑毒活性的影响

3.1 引言

3.2 材料

3.3 实验方法

3.4 结果

3.5 讨论

3.6 本章小结

第4章 深海细菌菌株代谢产物的生物安全性研究

4.1 引言

4.2 材料

4.3 实验方法

4.4 结果

4.5 讨论

4.6 本章小结

结论

参考文献

攻读硕士学位期间发表的论文及其他成果

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