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摘 要
Abstract
目 录
Contents
第1章 绪 论
1.1 课题背景及研究目的和意义
1.2 多糖的分类与组成及结构
1.2.1 多糖的分类
1.2.2 多糖的组成
1.2.3 多糖的结构
1.3 乳酸菌胞外多糖功能性研究进展
1.3.1 物理特性
1.3.2 抗肿瘤活性
1.3.3 抗氧化活性
1.3.4 免疫调节活性
1.3.5 其他生物活性
1.4 乳酸菌胞外多糖的结构测定
1.4.1 分离纯化
1.4.2 一级结构的研究
1.4.3 高级结构的研究
1.5 乳酸菌胞外多糖的构效关系
1.6 课题来源及主要研究内容
第2章 实验材料与方法
2.1.1 仪器与设备
2.1.2 试剂与药品
2.1.3 供试菌株与细胞
2.2 具有抑制HT-29细胞增殖作用的不同菌株乳酸菌胞外多糖的初筛
2.2.1 菌种活化与传代
2.2.2 发酵乳的制作流程
2.2.3 乳酸菌活性代谢产物的制备
2.2.4 乳酸菌活性代谢产物的筛选
2.2.5 初筛菌株的菌种鉴定
2.2.6 四株乳酸菌所产粗多糖的分离提取和纯化
2.2.7 初筛菌株所产胞外多糖的理化性质测定
2.3 初筛菌株所产胞外多糖对HT-29细胞诱导凋亡作用的研究
2.3.1 HT-29细胞抑制率的测定
2.3.2 HT-29细胞凋亡与坏死的测定
2.3.3 HT-29细胞周期的测定
2.3.4 HT-29细胞形态学的观察
2.3.5 四种酸性多糖对正常细胞毒性
2.3.6 四种酸性多糖对HT-29细胞Caspase-3蛋白活性的影响
2.4 L.casei SB27菌株所产酸性多糖的抗结肠癌作用研究
2.4.1 L.casei SB27菌株酸性多糖的进一步纯化
2.4.2 LW1和LW2对HT-29细胞的增殖抑制率
2.4.3 LW1和LW2对正常细胞毒性
2.4.4 HT-29细胞总RNA的提取
2.4.5 体外反转录合成及qRT-PCR反应
2.4.6 Western blot测定相关凋亡蛋白表达量的变化
2.4.7 透射电镜观察HT-29细胞凋亡形态
2.5 LW1和LW2胞外多糖组分的结构表征
2.5.1 分子量的测定
2.5.2 化学成分分析
2.5.3 单糖组成的测定
2.5.4 官能团和化学键的测定
2.5.5 甲基化分析
2.5.6 表面形态学观察
2.6 数据处理及统计分析
第3章 抗HT-29细胞增殖作用的乳酸菌胞外多糖初步筛选
3.1 引言
3.2 MTT法筛选供试菌株的免疫活性代谢产物
3.3 菌株鉴定
3.4 粗胞外多糖的理化性质
3.4.1 标准曲线
3.4.2 粗多糖的理化性质
3.5 粗胞外多糖的纯化及理化性质
3.5.1 粗胞外多糖的纯化
3.5.2 酸性多糖的理化性质
3.6 本章小结
第4章 四株乳酸菌胞外多糖诱导HT-29细胞凋亡作用的研究
4.1 引言
4.2 对HT-29细胞的增殖抑制作用
4.3 对HT-29细胞凋亡率的影响
4.4 对HT-29细胞周期的影响
4.5 酸性胞外多糖对HT-29细胞形态学的影响
4.5.1 HE染色观察
4.5.2 Hoechst染色观察
4.6 酸性胞外多糖对正常细胞的增殖抑制作用
4.7 酸性胞外多糖对HT-29细胞Caspase-3活性的影响
4.8 本章小结
第5章 LW1和LW2胞外多糖组分的抗结肠癌作用研究
5.1 引言
5.2 L. casei SB27所产EPSs的纯化
5.3 对HT-29细胞的增殖抑制作用
5.4 对正常细胞的增殖抑制作用
5.5 对凋亡相关基因表达量的影响
5.6 对凋亡相关蛋白表达水平的影响
5.7 对细胞凋亡形态学的影响
5.8 本章小结
第6章 LW1和LW2胞外多糖组分的结构表征
6.1 引言
6.2 分子量及纯度的测定
6.3 化学成分分析
6.4 单糖组成分析
6.5 官能团和化学键的分析
6.6 糖苷键连接键型的分析
6.6.1 甲基化程度的检测
6.6.2 甲基化结果分析
6.7 微观形态学观察
6.8 本章小结
结 论
创新点
展 望
参考文献
附录一
附录二
附录三
附录四
附录五
攻读博士学位期间发表的论文及其它成果
哈尔滨工业大学学位论文原创性声明和使用权限
致 谢
个人简历
