鹅细小病毒VP3基因和鹅副粘病毒F基因在重组禽痘病毒中联合表达

摘要

本文对鹅细小病毒VP3基因和鹅副粘病毒F基因在重组禽痘病毒中联合表达进行了探讨。本研究用LipofectaInine<'TM>2000-PLUS<'+> Reagent转染试剂将重组转移载体 pSY681-VP3(GPV)-F(GPMV)-LacZ转染禽痘病毒FPV-017感染的鸡胚成纤维(CEF)细胞，利用同源重组将两段外源基因插入禽痘病毒的基因组中，通过报告基因LacZ基因的表达进行五轮蓝斑筛选，获得纯化的重组病毒。经特异性引物作PCR检测，表明GPV-VP3基因和GPMV-F基因已插入禽痘病毒基因组中；通过Dot-ELISA和间接免疫荧光试验，证实VP3蛋白和F蛋白在重组病毒感染的CEF细胞中获得表达，并保持其反应原性，从而成功构建了同时表达鹅细小病毒VP3蛋白和鹅副粘病毒融合F糖蛋白的重组禽痘病毒。

目录

文摘

英文文摘

声明

1引言

1.1鹅细小病毒研究进展

1.1.1 GPV基因组结构特点

1.1.2 GPV基因编码蛋白

1.1.3鹅细小病毒病的防治及疫苗免疫预防现状

1.1.4 GPV基因工程疫苗

1.2鹅副粘病毒的研究进展

1.2.1鹅副粘病毒的一般特征及基因组成

1.2.2鹅副粘病毒编码结构蛋白及其分子生物学特征

1.2.3鹅源新城疫防治

2材料与方法

2.1实验材料

2.1.1质粒与菌株

2.1.2病毒及血清

2.1.3 SPF鸡胚

2.1.4主要生物学试剂

2.1.5细胞培养及转染试剂和材料

2.1.6引物设计

2.1.7主要溶液及其配制方法

2.1.8主要仪器

2.2实验方法

2.2.1鸡胚成纤维细胞的制备与亲本病毒的繁殖

2.2.2质粒转化与提取纯化

2.2.3重组质粒pSY681-VP3-F-LacZ的鉴定

2.2.4转染

2.2.5重组病毒的筛选与纯化

2.2.6重组病毒的鉴定

2.2.7重组病毒表达产物的鉴定

3结果

3.1禽痘病毒的繁殖

3.2重组转移载体pSY681-VP3(GPV)-F(GPMV)-LacZ的酶切鉴定

3.3质粒浓度测定

3.4重组禽痘病毒筛选与纯化

3.5重组禽痘病毒的鉴定

3.5.1 PCR鉴定结果

3.5.2表达产物的鉴定结果

4讨论

4.1转染、筛选和纯化

4.2重组病毒的表达

5结论

致谢

参考文献

附录

攻读学位期间发表的学术论文