鹅副粘病毒NA-1株、鹅细小病毒主要免疫原性蛋白F基因与VP3基因的表达研究

摘要

本文参考GeneBank登录的相关鹅副粘病毒(GPMV)基因组核苷酸序列,设计并合成了一对特异性引物,采用RT-PCR技术对GPMVNA-1株的F基因进行扩增(终止密码子去除),将目的基因插入到原核表达载体PET-28a的多克隆位点(EcoRⅠ、SalⅠ),构建了表达GPMVF基因的原核表达载体PEF;插入到转座载体PFastBacⅠ的多克隆位点,构建了转座质粒PFF,PFF转化DH10Bac后,F基因在助手质粒的帮助下,通过转座进入Bacmid,构建了重组表达载体BacmidF.原核重组表达载体PEF转化到BL21(DE3)中,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测到约60kDa的蛋白;重组表达载体BacmidF,转染Sf-9昆虫细胞,在昆虫细胞内,重组Bacmid经复制、表达、装配,形成重组杆状病毒,并表达了GPMVNA-1株的F基因.经表达条件的优化及SDS-PAGE和Western-blot分析,显示两种表达系统表达的F蛋白分子量均约为60kDa,其中原核表达载体PEF转化到BL21(DE3)中,经IPTG诱导3h表达量最高占菌体的32.2％,重组表达载体BacmidF,转染Sf-9昆虫细胞表达的F蛋白占整个菌体的10％,表达产物具有良好的特异性.