微孔板法测定乳粉中叶酸的含量

摘要

维生素是保持生命体正常生理功能和新陈代谢所必须的一类有机物。在机体内含量非常少，需要从食物中获得。长时期缺少某种维生素，会引发机体相应的缺乏症状。水溶性的维生素包含维生素C和B族维生素。而B族维生素是辅酶或辅基的重要组成部分，参加机体内的代谢过程，不能够在机体内长时间贮存或者贮存的含量极少，并且易被消耗代谢，每天都需要补充[1]。叶酸其实是B族维生素中的一种，它是人体健康中必不可少的部分，所以叶酸的每日叶酸摄取量和叶酸的测定方法及其毒理学作用的研究都是现如今研究的热门话题，而且叶酸的测定方法是研究这些问题的基础和前提，所以叶酸的检测方法则变得特别重要。如何准确测出叶酸的含量就是衡量检测方法好坏的重要标准之一。 微生物法是测定叶酸的常用方法，可以准确的检测出具有生化活性的叶酸，结果表示出的是基体中的叶酸含量，这也是微生物测定法不同于其他的检测方法的最大的优点，是仪器测定方法难以达到的。现在大部分国际标准的测定方法都将微生物检测法当做多种维生素检验的第一标准[2]。在我国现在实行的国家检测标准里也仍然用微生物方法检测乳制品和婴幼儿配方食品中的叶酸。 酪乳酸杆菌(ATCC7469)相对叶酸有极强的特异性，叶酸作为该菌必需的生长因子，而且在一定的生长环境下，该菌生长和增殖的速率与体系中叶酸的含量具有一定的比例关系，微生物法则是依据这个原理对叶酸定量分析的。 微生物法的检测过程一般会分为以下六个检测步骤:1）工作菌悬液的制备;2）检测样品和工作标准曲线的制备;3）测试培养基的制备，现在可以应用成品培养基;4）灭菌及接种和培养;5）样品测定，主要方法是光密度法;6）计算。 本文基于对微生物方法的原理和基本的分析步骤制定了微孔板的测定方法，通过对十组的未知浓度的样品重复五次测定，得到样品的相对标准偏差均＜2％;通过的已知浓度样品的测定，得出实验的相对误差＜2％;实验的回收率范围为98％-106％;线性的相关系数也可以达到0.9995以上;同次实验的平行孔间的变异系数也都＜5％。所以，微孔板法可以用来准确的测定乳粉中叶酸的含量，并且相比较传统的试管方法，可以大量的缩短实验的操作时间，降低实验的难度，同时节约了实验成本。 微孔板法的优势在于成本少、灵敏度高、适用于数量大的样品测定、可操作性强;随着当代的科技迅速发展，很多的仪器检测方法都被开发出来，用以检测低含量的叶酸食品。可仪器检测方法只是对叶酸的衍生物和某种一定结构的叶酸进行检测分析，但是对所有结构形式的叶酸测定分析时，实验的难度和复杂程度会很大，成本也会相应的升高。因此，在进行分析检验时，研究人员可以依据不同的研究目的来决定测定方法。

目录

声明

摘要

1引言

1．1叶酸的发现

1．2叶酸的性质

1．3叶酸的结构

1．4叶酸的制备

1．4．1叶酸的来源

1．4．2叶酸的提取

1．4．3叶酸的合成

1．5叶酸与人体健康的关系

1．5．1叶酸的药理毒理

1．5．2叶酸的生理功能

1．5．3叶酸缺乏

1．5．4叶酸过剩

1．6叶酸的应用

1．6．1在食品行业的应用

1．6．2在饲料方面的应用

1．6．3在医药和保健品行业的应用

1．7叶酸的测定方法

1．7．1比色法

1．7．2色谱法

1．7．3微生物法

1．7．4其他检测方法

1．8实验原理

1．9研究内容与意义

1．9．1研究内容

1．9．2研究意义

2材料与方法

2．1实验材料

2．1．1菌种

2．1．2培养基

2．1．3试剂和耗材

2．1．4仪器和设备

2．1．5实验样品

2．2实验方法

2．2．1传统试管法

2．2．2微孔板法

3结果与分析

3．1精密度对比

3．2准确度对比

3．3平行度对比

3．4线性对比

3．5曲线、测量范围对比

3．6回收率对比

3．7前处理对比

3．8人员比对

4讨论

5结论

致谢

参考文献