紫椴花多糖的提取、分离纯化及抗氧化活性研究

摘要

紫椴(Tilia amurensis Rupr.)是我国东北地区重要的经济树种，隶属于椴树科(Tiliaceae)椴树属（Tilia），为高大落叶乔木。紫椴花中多糖含量丰富，是一种理想的植物多糖原料，具有重要研究价值。本文以紫椴花为原料，对紫椴花多糖的提取、分离纯化及抗氧化活性进行了系统研究，旨在为我国紫椴资源的综合开发利用提供新的方向和参考依据，具体研究内容及结果如下:
　　紫椴花多糖提取工艺的优化研究。以紫椴花多糖得率为指标，采用微波提取、酶法辅助提取两种方法对紫椴花多糖提取工艺进行了优化。结果表明，微波提取紫椴花多糖得率高于酶法，可达12.57％，最佳工艺条件为:微波时间9.14min，微波功率585W，料液比1∶67(g∶mL)。
　　紫椴花粗多糖的理化性质及体外抗氧化活性研究。通过苯酚-硫酸反应、斐林试剂反应等化学方法对紫椴花粗多糖的基本理化性质进行分析，得出紫椴花多糖具有多糖的通性，苯酚-硫酸法测得其总糖含量为65.28％，硫酸-咔唑法测得糖醛酸含量为39.25％。红外光谱分析显示紫椴花多糖有典型的多糖特征吸收峰。体外抗氧化实验表明紫椴花粗多糖具有还原能力，能够清除DPPH自由基和羟自由基，同时有很强的抑制脂质过氧化作用。当紫椴花多糖浓度为1.8mg·mL-1时，对羟自由基的清除率高达88.19％;当紫椴花多糖浓度为2.0mg·mL-1时，对脂质过氧化的抑制率已达到75.42％，高于相同浓度的抗坏血酸。
　　紫椴花粗多糖体内抗氧化活性研究。通过建立D-半乳糖致小鼠衰老模型，研究紫椴花粗多糖体内抗氧化活性。结果表明紫椴花粗多糖能够显著提升衰老小鼠肝组织中T-SOD活性、血清中GSH-PX活性，同时显著降低衰老小鼠血清、肝组织和脑组织中MDA含量，其中低、中、高剂量组小鼠血清中MDA含量与模型组相比差异极显著，中、高剂量组小鼠脑组织中MDA含量与模型组相比差异极显著，显示出紫椴花粗多糖具有良好的体内抗氧化活性。
　　紫椴花多糖的分离纯化及表征分析。采用DEAE-52阴离子纤维素交换层析对紫椴花多糖(TAP)进行纯化得到三个多糖组分（TAP-1、TAP-2和TAP-3）。对含量较多的TAP-3组分进行深入研究:采用紫外光谱扫描(UV)、冻融分析和高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)对TAP-3进行纯度鉴定，确定TAP-3为不含核酸和蛋白质的均一多糖组分。采用红外光谱(FT-IR)、高效凝胶渗透色谱（HPGPC）和气质联用(GC-MS)对TAP-3结构表征进行分析，得到TAP-3的相对分子质量为5376 Da，是由核糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖七种单糖以摩尔比例0.76∶23.28∶15.02∶15.87∶3.44∶3.33∶24.59组成的杂多糖。

目录

摘要

1 绪论

1．1 紫椴的研究概况

1．1．1 紫椴的概述

1．1．2 紫椴的国内研究进展

1．1．3 紫椴的国外研究进展

1．2 椴树属植物化学成分的研究进展

1．3 植物多糖的研究概况

1．3．1 植物多糖概述

1．3．2 植物多糖的提取方法

1．3．3 植物多糖的生物活性

1．3．4 植物多糖的纯化及表征分析

1．4 论文的立题依据和主要研究内容

1．4．1 论文的立题依据和目的意义

1．4．2 论文的主要研究内容

2 紫椴花多糖提取工艺的研究

2．1 试验材料

2．2 试验方法

2．2．1 原料预处理

2．2．2 多糖提取的工艺流程

2．2．3 多糖含量的测定方法

2．2．4 微波辅助提取法

2．2．5 纤维素酶辅助提取法

2．3 结果与分析

2．3．1 葡萄糖标准曲线

2．3．2 紫椴花多糖微波辅助提取法的结果分析

2．3．3 紫椴花多糖纤维素酶辅助提取法的结果分析

2．3．4 紫椴花多糖微波法和酶法提取工艺比较

2．4 本章小结

3 紫椴花粗多糖的理化性质及体外抗氧化活性

3．1 试验材料

3．2 试验方法

3．2．1 紫椴花粗多糖的制备

3．2．2 紫椴花多糖的理化性质分析

3．2．3 紫椴花粗多糖的体外抗氧化活性

3．3 结果与分析

3．3．1 紫椴花粗多糖的理化性质分析结果

3．3．2 总糖及糖醛酸含量检测结果分析

3．3．3 红外光谱结果分析

3．3．4 紫椴花多糖体外抗氧化活性的测定结果分析

3．4 本章小结

4 紫椴花多糖的体内抗氧化活性

4．1 试验材料

4．1．1 试验原料

4．1．2 试验动物

4．2 试验方法

4．2．2 动物血清及组织匀浆的制备

4．2．1 动物分组、给药方式

4．2．3 体内抗氧化指标测定

4．2．4 数据统计学分析

4．3 结果与分析

4．3．1 不同给药方式对小鼠体重变化的影响

4．3．2 小鼠肝、脑组织匀浆蛋白质含量

4．3．3 紫椴花多糖对小鼠肝、脑、血清中MDA含量的影响

4．3．4 紫椴花多糖对小鼠肝脏、脑、血清中T-SOD活性的影响

4．3．5 紫椴花多糖对小鼠肝脏、血清中GSH-PX活性的影响

4．4 本章小结

5 紫椴花多糖的纯化及表征分析

5．1 试验方法

5．1．1 粗多糖的制备

5．1．2 DEAE-52离子交换层析

5．1．3 纯化多糖纯度鉴定

5．1．4 纯化多糖结构表征分析

5．2 结果与分析

5．2．1 DEAE-52离子交换层析结果分析

5．2．2 纯化多糖纯度鉴定结果分析

5．2．3 纯化多糖结构表征结果分析

5．3 本章小结

结论

参考文献

附录

攻读学位期间发表的学术论文

致谢

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