普洱茶多糖的分离纯化及山麦冬多糖的初步生物学活性实验研究

摘要

本文以普洱茶和山麦冬为研究对象,材料经乙醇脱脂、热水浸提、Sevage法脱蛋白、乙醇沉淀等处理且通过正交设计实验确定了普洱茶综合提取的最佳工艺,得粗多糖。普洱茶粗多糖以DEAE一纤维素离子交换柱层析方法进行纯化得单一多糖成分,然后用聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳鉴定纯度；山麦冬粗多糖经微滤除去不溶性物质后依次进行超滤和纳滤,分别得截留液和透过液。将各步截留液减压浓缩、冷冻干燥,得5千/1千(A)、1万/3千(B)、3万/5千(C)、3万(D)分子量分布范围的山麦冬多糖干品,并对所得四个分子量段多糖成分的相关生物学活性进行了研究。本课题具体研究结果如下： 以普洱茶为材料、水为提取溶剂,通过正交设计考察了浸提温度、浸提时间、溶剂用量、浸提次数4个因素对其所含茶多酚和茶多糖提取得率的影响,优化了茶多酚和茶多糖综合提取工艺。结果表明,最佳提取工艺条件为浸提温度80℃,浸提时间1h,溶剂用量(固液比)1:10,浸提次数1次。 普洱茶粗多糖(TPS)经DEAE-纤维素层析,一共收集到TPS1、TPS2、TPS3、TPS4、TPS5五个组分,其中以TPS3的量最大。对TPS3进行了深入的研究得到主要组分TPS3a.对TPS3a进行了纯度及部分理化性质鉴定,证明TPS3a为单一多糖,且其多糖含量为71.29％。 四个分子量段的山麦冬多糖溶液按高低两个剂量组分别作用于四氧嘧啶所致高血糖模型小鼠并测定血糖值,表明各分子量段山麦冬多糖给药组的血糖值都低于同剂量空白对照组,且高剂量组降血糖效果显著。尤其是3万/5千分子量段的山麦冬多糖高剂量给药组与对应空白对照组相比,在各时间点的血糖值均有极显著性差异。 四个分子量段的山麦冬多糖溶液分别作用于环磷酰胺致免疫缺陷模型小鼠并测定吞噬系数、半数溶血值HC50、脏器指数,表明山麦冬多糖确实具有免疫增强作用,但是因其分子量分布范围的不同作用效果也有较大差异。其中,3万/5千组、1万/3千组的HC50均有显著增加；3万/5千组、3万组的吞噬指数均有明显增加。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章绪论

1.1研究背景

1.1.1植物多糖研究概述

1.1.2多糖与降血糖

1.1.3多糖与免疫调节

1.2课题的目的及意义

1.2.1为普洱茶多糖的保健品开发奠定基础

1.2.2为山麦冬多糖的药理研究提供理论依据

1.3课题的研究内容及思路

1.3.1课题的研究内容

1.3.2课题的研究思路

第二章普洱茶多糖的研究

2.1引言

2.2普洱茶水提取的正交实验设计

2.2.1材料与试剂

2.2.2主要仪器与设备

2.2.3正交实验

2.3普洱茶多糖的提取分离纯化

2.3.1普洱茶多糖的提取工艺

2.3.2普洱茶多糖的分离纯化工艺

2.3.3普洱茶多糖的纯度鉴定

2.3.4普洱茶多糖部分理化性质研究

2.4实验结果

2.4.1水提取正交实验结果

2.4.2普洱茶多糖的提取与分离纯化

2.4.3普洱茶多糖的纯度鉴定

2.4.4普洱茶多糖部分理化性质研究

第三章山麦冬多糖的研究

3.1引言

3.2超滤膜分离纯化山麦冬多糖

3.2.1材料与仪器

3.2.2山麦冬多糖提取液的制备

3.2.3山麦冬多糖的膜分离方法

3.2.4多糖和蛋白的含量测定方法

3.2.5实验结果

3.3山麦冬多糖的降血糖与免疫功能实验研究

3.3.1材料与试剂

3.3.2对四氧嘧啶所致高血糖模型小鼠血糖的影响

3.3.3对小鼠口服葡萄糖耐量的影响

3.3.4对免疫器官的脏器系数的影响

3.3.5溶血素实验

3.3.6碳粒廓清实验

3.3.7实验结果

3.3.8实验讨论

第四章结论与展望

4.1本文主要结论

4.2后续工作建议

第五章文献综述

5.1多糖的生物学活性研究

5.1.1免疫调节作用

5.1.2抗肿瘤作用

5.1.3抗感染作用

5.1.4抗氧化作用

5.1.5降血糖作用

5.1.6其它作用

5.2多糖的制备

5.2.1多糖的提取

5.2.2多糖的分离

5.2.3多糖的纯化

参考文献

致 谢

附 录