HLA-DRB1基因多态性与儿童特发性血小板减少性紫癜的相关性

摘要

研究背景：特发性血小板减少性紫癜(ITP)又称自身免疫性血小板减少性紫癜；因为其发病与免疫功能异常直接相关，因此，近几年也有人认为应称为“原发性血小板减少症”，是小儿时期最常见的出血性疾病。临床上主要按病程是否超过六个月分为急性型(aITP)和慢性型(cITP)两种类型。目前关于本病的病因和发病机制尚未完全清楚。但其作为一种常见的自身免疫性疾病，其具有免疫性疾病的一些共同特点，例如疾病的发生与体液免疫和(或)细胞免疫有关，并有一定的遗传倾向。人类白细胞抗原(HLA)是人体内能引起强排斥反应的主要组织相容性抗原系统，是人类最复杂、最具多态性的遗传系统，其功能不仅与移植排斥有关，而且也涉及到机体免疫应答的各个方面。HLA-DRB1作为HLA系统中的一个重要的基因座位，和人体免疫系统有密切关系。近年来关于HLA-DRB1基因多态性与成人ITP的关系多有研究。但儿童ITP是否与HLA-DRB1基因相关以及如何相关研究相对较少。
　　 幽门螺旋杆菌(Hp)是一种革兰氏染色阴性微需氧菌，已公认为是胃溃疡和十二指肠溃疡的主要致病菌，并和胃癌、粘膜相关性淋巴样组织淋巴瘤有关。近年来，关于幽门螺旋杆菌和特发性血小板减少性紫癜及根除幽门螺旋杆菌后血小板上升的研究越来越多。近年研究发现宿主遗传因素的影响在成人Hp致ITP方面发挥重要的作用。Veneri发现Hp阳性cITP患者和Hp阴性的cITP患者具有在遗传学上的差别：即Hp阳性cITP患者HLA-DRB1*11，*14和HLA-DQB1*03的等位基因频率较Hp阴性的cITP患者明显升高，而HLA-DRB1*03基因频率明显降低。儿童ITP是否易感Hp及与HLA遗传基因是否具有相关性亦是研究较少。
　　 目前关于ITP、HLA及Hp的关系的研究主要集中于成人的研究，而儿童ITP与HLA基因多态性及Hp感染的关系的研究，国内外资料较少，而且结论不尽一致，儿童ITP与成人ITP类型及发病机理有着一定的差别。在我国儿童ITP的HLA基因多态性状况，遗传因素是否在影响儿童ITP易感Hp方面发挥重要的作用，Hp感染状况如何，Hp是否参与了儿童ITP的发病，其致病机理是否与成人相同，进而能否通过根除：Hp来治疗Hp相关ITP，这是一直困扰我们，也是迫切需要解决的问题。
　　 研究目的：
　　 1.研究儿童ITP的HLA-DRB1基因多态性。
　　 2.研究Hp感染状况、Hp感染与儿童cITP之间的关系及清除Hp对cITP的疗效。
　　 3.HLA-DRB1基因多态性与Hp感染及ITP分型的关系。
　　 研究对象：选郑州大学第一附属医院儿科2007年7月～2008年12月住院及门诊长期随访的ITP患儿200例为研究对象，均为河南籍汉族儿童，均符合1999年全国小儿血液会议中华医学会儿科分会修订的ITP诊断标准。其中男97例，女103例，年龄2月～14岁(中位年龄6.8岁)，aITP患儿118例，cITP患儿82例。以年龄，性别为匹配因素按群体匹配原则随机选取郑州大学第一附属医院体检的健康儿童200例为对照。在患儿家属知情同意前提下抽取外周静脉血3ml。
　　 研究方法：
　　 1.用胶体金法检测全血Hp-IgG抗体及ELISA双夹心法检测粪便Hp抗原两者联合检测确定Hp感染。
　　 2.Hp(+)cITP患儿随机分为2组：治疗组20例，应用糖皮质激素+抗Hp治疗；对照组20例，单用糖皮质激素治疗。记录并统计两组患儿治疗前后血小板计数变化。
　　 3.应用PCR-SSP方法检测ITP患儿HLA-DRB1*11，HLA-DRB1*14，HLA-DRB1*07，HLA-DRB1*08基因。
　　 研究结果：
　　 1.Hp感染率aITP患儿Hp感染率为45.8％，cITP患儿Hp感染率为48.8％，健康儿童Hp感染率为39.5％，三者比较无统计学差异，而且Hp感染和儿童ITP间无关联性。
　　 2.cITP患儿不同组别治疗前后血小板计数的比较应用重复测量设计方差分析进行统计学处理，治疗组与对照组疗效差异无统计学意义。各组治疗前后血小板数比较有统计学意义。
　　 3.HLA-DRB1*11，HLA-DRB1*14、HLA-DRB1*07，HLA-DRB1*08基因与Hp及ITP的关系ITP患儿HLA-DRB1*14阳性率为9.5％(19/200)，健康对照组HLA-DRB1*14阳性率为9.0％(18/200)，两者比较差异无统计学意义。aITP患儿HLA-DRB1*14阳性率为9.3％(11/118)，cITP患儿HLA-DRB1*14阳性率为9.8％(8/82)，两者比较差异无统计学意义。Hp+ITP患儿HLA-DRB1*14阳性率为15.9％(15/94)，Hp-ITP患儿HLA-DRB1*14阳性率为3.8％(4/106)，两者比较差异有统计学意义。
　　 ITP患儿HLA-DRB1*11阳性率为14.5％(29/200)，健康对照组HLA-DRB1*11阳性率为9.0％(18/200)，两者比较差异无统计学意义。aITP患儿HLA-DRB1*11阳性率为9.3％(11/118)，cITP患儿HLA-DRB1*11阳性率为22.0％(18/82)，两者比较差异有统计学意义。Hp+ITP患儿HLA-DRB1*11阳性率为22.3％(21/94)，Hp-ITP患儿HLA-DRB1*11阳性率为7.5％(8/106)，两者比较差异有统计学意义。ITP患儿HLA-DRB1*07阳性率为6.5％(13/200)，健康对照组HLA-DRB1*07阳性率为13.5％(27/200)，两者比较差异有统计学意义。alTP患儿HLA-DRB1*07阳性率为5.9％(7/118)，cITP患儿HLA-DRB1*07阳性率为7.3％(6/82)，两者比较差异无统计学意义。Hp+ITP患儿HLA-DRB1*07阳性率为5.3％(5/94)，Hp-ITP患儿HLA-DRB1*07阳性率为7.5％(8/106)，两者比较差异无统计学意义。本试验未检出HLA-DRB1*08阳性病例。
　　 结论：
　　 1.证实aITP，cITP和正常儿童的Hp感染率没有统计学差异。从病因学上讲：Hp感染和儿童ITP间无关联性，表明Hp感染不是ITP发病的必要病因。
　　 2.证实儿童cITP患者Hp根治术合用糖皮质激素能升高血小板数，但其与正常对照组无统计学差异，说明根治Hp感染不是治疗ITP的一个必要条件。
　　 3.提示HLA-DRB1*11，HLA-DRB1*14基因可能是儿童ITP患儿Hp感染的易感因素，具有HLA-DRB1*11的ITP患儿易发展为cITP，HLA-DRB1*07可能对儿童ITP的发病具有保护作用。