肝癌靶向的阿霉素—脂质—聚阳离子—DNA复合物的制备及体内评价

摘要

目的：恶性肿瘤是严重威胁人类健康的疾病,癌症已经成为一个严重的社会问题。阿霉素是一种广谱抗癌药,对于肿瘤具有良好的抑制效果,但是由于其严重的毒副作用,尤其是心脏毒性大,使其在临床使用上受到限制。聚乙烯亚胺(PEI)-DNA-阿霉素(DOX)复合物能够有效的递送阿霉素到达靶部位减少阿霉素毒副作用的同时实现了靶向治疗。本实验用脂质体包裹PEI-DNA-DOX复合物制备成具有肝癌靶向作用的纳米粒,以期降低阿霉素的毒副作用,增强药物的肝靶向性。
　　 方法：首先,确定了阿霉素含量测定条件,制备PEI-DNA-DOX脂质复合物并考察其制剂学性质;然后,考察制剂的体内药物动力学性质,建立体内分析方法,确定给药剂量;最后,考察了制剂的体内分布并进行了药物体内靶向性评价。
　　 结果；⑴确定测定阿霉素含量的高相液相色谱;流动相,甲醇-0.01M磷酸盐缓冲液-冰乙酸(85:15:0.25;V/V);检测器,荧光检测器;检测波长,Ex:505nm,Em:559nm;流速1ml/min;柱温,25℃;进样量,20μl。⑵DNA与DOX反应的最佳条件为:阿霉素的浓度为60μg/ml在pH值为4的缓冲液中室温孵育60min;确定PEI/DNA压缩体的N/P摩尔比为22,liposome与pDNA的摩尔比值为210。⑶建立了阿霉素体内分析方法,该方法专属性强,重现性好,获得的血浆样品的标准曲线为:C=0.0458A-2.9078;R2=0.9997,线性范围为:0.375～192μg/ml。药物动力学研究结果表明,阿霉素溶液体内过程符合三室模型,t1/2pi=2.484min,t1/2a=27.778min,t1/2β=1042.892min。阿霉素-LPD复合物体内过程也符合三室模型,t1/2pi=8.244min,t1/2a=225.172min,t1/2β=269538.91min。以半数致死量为依据,最终确定小鼠给药剂量为0.6mg/kg。⑷组织分布结果表明,与原料药相比,制剂中阿霉素在心脏中的分布明显减少,在肝、脾中的蓄积明显增多;靶向性评价结果为:阿霉素-脂质-聚阳离子-DNA复合物静脉注射后在肝脏中的AuC值比其他各组织中的AUC至少高3.6倍以上,阿霉素-脂质-聚阳离子-DNA复合物组在各脏器组织中的药物峰浓度明显小于阿霉素溶液组在各脏器组织中的药物峰浓度,而在肝、脾组织中的药物峰浓度却是阿霉素溶液1.5倍以上;肝脏中的Re值明显大于其他组织,以上三个数据说明阿霉素-脂质-聚阳离子-DNA复合物的具有较好的肝靶向性。
　　 结论：对阿霉素-脂质-聚阳离子-DNA复合物进行了较为系统地研究,建立了阿霉素体内外含量测定的分析方法,对阿霉素-脂质-聚阳离子-DNA复合物的制备工艺及处方、包封率、稳定性、体内药物动力学、组织分布及靶向性评价进行了研究和分析评价,制备成LPD后能够明显降低阿霉素的心脏毒性,提高其肝靶向性。