毛蚶酶解液营养评价及其生理功效的研究

摘要

毛蚶属于我国沿海重要的养殖经济贝类之一，其体内富含蛋白却含较低的脂肪，具有一定的药用价值，口感鲜美，深受大众喜爱。本课题以毛蚶为研究对象，研究酶解工艺条件对毛蚶水解效果的影响、毛蚶酶解液制备的工艺优化、酶解液中肽类物质的功能和特性，为开发利用毛蚶酶解液奠定基础。主要研究内容及结果如下:
　　 (1)研究了不同酶解条件对蛋白酶水解毛蚶效果的影响。选取加酶量、温度、pH值和反应时间四个因素对蛋白酶酶解效果进行正交试验。
　　 中性蛋白酶酶解工艺最佳条件为:加酶量0.8％，水解温度50℃，pH7.5的条件下反应7h;木瓜蛋白酶酶解工艺最佳条件为:加酶量1.0％，水解温度45℃，pH7.5的条件下反应8h。
　　 (2)研究不同处理条件下蛋白质变性程度对酶解特性的影响。实验结果表明蛋白质变性程度增大，不利于酶解，水解度越低。
　　 (3)通过SDS-PAGE电泳测定酶解液的相对分子量范围，发现酶解液中多为分子量14400Da左右的多肽。
　　 (4)以酪蛋白组为对照组，分别用毛蚶原浆粉和两种蛋白酶水解后的酶解液粉状物作为饲料的蛋白质来源，配制人工半合成饲料，采用对喂法，进行大鼠营养生理功能实验。酶解组的蛋白质消化率和净利用率都比原浆组高。
　　 在血脂方面，中性蛋白酶酶解组大鼠血清的TC、TG、LDL-C较原浆组大鼠低，HDL-C较原浆组大鼠高，证明这类酶解后的肽类物质对血脂调节具有显著地作用。
　　 在抗氧化方面，中性蛋白酶酶解组大鼠血清及肝组织中的SOD、GSH-Px酶活性较原浆组大鼠的酶活性高，而MDA含量较原浆组大鼠的含量低，证实该酶解液中所含肽类物质可起到较好的抗氧化功效。
　　 (5)将70只小鼠随机分成7组。以普通饲料喂食正常对照组小鼠，高脂饲料喂食其他各组。正常对照组和高脂模型组每天灌胃相应体积蒸馏水;Vc组和辛伐他汀组阳性药物组分别给予20mg/(kg·d)Vc、0.5mg/(kg·d)辛伐他汀;中性蛋白酶酶解高、中、低剂量组，分别以1500mg/(kg·d)、1000 mg/(kg·d)、500mg/(kg·d)中性蛋白酶酶解液灌胃，连续给药6周后检测小鼠血清和组织各项指标。
　　 实验结果证明中毛蚶酶解液对食源性高脂模型组小鼠的脂代谢具有较强的调节作用，可以显著地降低血清中的TC、TG、LDL-C，并升高血清中的HDL-C。
　　 灌胃毛蚶酶解液组的小鼠肝、肾组织中的SOD及GSH-Px酶活性显著升高，MDA含量显著降低，证实该类酶解液在体内通过调节抗氧化物酶活力降低脂质过氧化的程度，而促进降脂。

目录

声明

摘要

1 引言

1．1 毛蚶生物学特性

1．1．1 毛蚶的分布及形态特征

1．1．2 毛蚶生化特征

1．2 海洋贝类活性多肽的研究进展

1．2．1 抗肿瘤活性肽

1．2．2 抗病毒活性肽

1．2．3 抗氧化活性肽

1．2．4 抗菌活性肽

1．2．5 抗高血压活性肽

1．3 研究目的意义

1．4 主要研究内容

2 蛋白质变性及酶解工艺的研究

2．1 材料与仪器

2．1．1 实验材料

2．1．2 主要试剂

2．1．3 主要仪器

2．2 实验方法

2．2．1 贝类脱壳及匀浆方法

2．2．2 低场核磁共振

2．2．3 差示扫描量热法

2．2．4 水分含量的测定

2．2．5 粗蛋白含量的测定

2．2．6 酶活力的测定

2．2．7 毛蚶酶解液的制备流程

2．2．8 游离氨基态氮的测定

2．2．9 正交实验

2．3 结果与分析

2．3．1 核磁共振分析蛋白质变性情况

2．3．2 差示扫描量热法分析蛋白质变性情况

2．3．3 酪氨酸标准曲线及酶活力测定

2．3．4 样品组分含量测定

2．3．5 正交试验结果

2．4 结论

3 酶解液分子量的确定

3．1 材料与仪器

3．1．1 主要试剂

3．1．2 主要仪器

3．2 实验方法

3．2．1 溶液的配置

3．2．2 胶的配置

3．2．3 灌胶

3．2．4 上样

3．2．5 电泳

3．2．6 染色及脱色

3．2．7 成像

3．3 结果与分析

3．4 结论

4 毛蚶酶解液营养生理功能研究

4．1 材料与仪器

4．1．1 实验材料

4．1．2 主要试剂

4．1．3 主要仪器

4．2 实验方法

4．2．1 毛蚶粉的制备

4．2．2 半合成饲料的配制

4．2．3 动物分组与饲养

4．2．4 粪便、尿液氮含量的测定

4．2．5 蛋白质营养学评价指标

4．2．6 血常规检测

4．2．7 血清生化指标检测

4．2．8 肝脏组织的处理

4．2．9 蛋白质含量测定

4．2．10 SOD活力的测定

4．2．11 GSH-Px活力的测定

4．2．12 MDA含量的测定

4．2．13 统计学处理

4．3 结果与分析

4．3．1 大鼠生长情况

4．3．2 氮平衡及蛋白质营养评价

4．3．3 大鼠血常规检测

4．3．4 大鼠生理生化指标

4．3．5 大鼠体内抗氧化指标

4．4 结论

5 毛蚶酶解液降脂及抗氧化研究

5．1 试剂与仪器

5．1．1 实验材料

5．1．2 主要试剂

5．1．3 主要仪器

5．2 实验方法

5．2．1 高脂饲料的配制

5．2．2 动物分组与饲养

5．2．3 指标的测定

5．2．4 肝组织切片的制作

5．2．5 统计学处理

5．3 结果与分析

5．3．1 小鼠脂代谢指标

5．3．2 组织中抗氧化指标

5．3．3 肝组织病理切片结果

5．4 结论

6．总结

参考文献

附录

个人简历

致谢