P16、RASSF1A和FHIT基因启动子甲基化在肺癌辅助诊断中的价值

摘要

背景:
　　 目前肺癌已成为癌症死亡的首要原因，在许多国家其发病率及死亡率呈上升趋势，在中国，肺癌是肿瘤相关死亡的首要原因。肺癌5年总的生存率不到15％，主要是因为大多数患者发现的时候已经到了晚期，在疾病的早期诊断和治疗会大大降低肺癌的死亡率，所以如何提高早期诊断成了亟待解决的问题，传统的早期诊断方法主要依靠影像学、痰脱落细胞和纤维支气管镜检查，这些诊断技术并没有在很大程度上改善肺癌患者的死亡率，因此，提高对肺癌的诊治水平是肿瘤临床工作的当务之急。筛选的挖掘有价值的早期肿瘤标志物成为亟待解决的问题之一，分子生物学标志物是提高肺癌诊断的一种新方法，近年来表观遗传学成为分子生物学研究的一个热点，表观遗传学是可以促进肿瘤从早期向晚期进展，基因甲基化是表观遗传学主要修饰方式，在许多恶性肿瘤中例如乳腺癌、肝癌、前列腺癌、肺癌中均检测到启动子区CpG位点甲基化，CpG岛启动子区胞嘧啶的异常甲基化导致肿瘤细胞抑癌基因的转录沉默已经被认为是人类癌症的一个重要特征，这已经被许多抑癌基因所证实，包括p16，RASSF1A和FHIT基因在多种癌症中均被检测到，并且多个学者研究发现以上3种基因在癌症中均处于中至高度水平，CpG岛启动子区甲基化是一个早期事件，因此甲基化检测很有可能会成为一种早期检测癌症的标志物。
　　 目的:
　　 探讨外周血p16、RASSF1A和FHrr基因甲基化与肺癌发生发展的关系。
　　 对象与方法:
　　 1.研究对象的选择:自2011年7月至2012年7月从郑州大学第一附属医院呼吸内科取180例原发性肺癌患者的外周血;180例正常对照血标本取自同一时期来自郑州大学第一附属医院体检科体检的正常人群，这些人群均在知情同意情况下由郑大一附院呼吸内科医生收集研究对象的临床资料并采集外周血。
　　 2.DNA甲基化水平检测:用实时荧光定量甲基化特异性PCR分析p16、RASSF1A和FHIT基因甲基化水平。
　　 3.对肺癌组和对照组常用肿瘤标志物进行统计，肿瘤标志物包括CA125、CA19-9、CEA、NSE和CYFRA21-1A。
　　 4.采用SPSS12.0软件对数据进行统计学分析下。根据定量资料分布类型选择描述方法。因数据均不符合正态分布所以采用中位数和四分位间距描述，定性资料组间比较用x2检验。对于偏态分布的定量资料两独立样本之间比较用Mann-WhitnyU检验，多组独立样本之间用KruskalWallis检验。构建受试者操作特性（receiveroperatingcharacteristics，ROC）曲线，根据ROC曲线面积比较不同指标对早期肺癌诊断的价值，以α=0.05为检验水准。
　　 结果:
　　 1.甲基化水平检测结果:肺癌组p16、RASSF1A和FHIT基因甲基化的水平均高于对照组，差异均具有统计学意义(P=0.008，P=0.038，P=0.002);单因素方差分析p16、RASSF1A和FHIT基因的甲基化水平与性别、年龄、吸烟史和肺癌的组织学类型及临床分期均无明显关联(P＞0.05)，并按p16、RASSF1A和FHIT基因甲基化水平的中位数为分界点分别将肺癌组和对照组分为低危组和高危组，随着甲基化水平的增高，患肺癌危险性增加(OR依次为1.597，1.551，1.763)。
　　 2.单独检测一个指标情况下，比较启动子高甲基化的DNAp16、RASSF1A和FHIT基因和临床上常用的CA125、CA19-9、CEA、NSE和CYFRA21-1指标，对肺癌诊断价值最高的是CEA，而对Ⅰ+Ⅱ期肺癌的诊断价值启动子发生高甲基化的p16、RASSF1A和FHIT基因均高于临床上CA125、CA19-9、CEA、NSE、CYFRA21-1对肺癌的诊断价值。且对早期肺癌的诊断价值最高的是P16基因。
　　 结论:
　　 1.外周血p16、RASSF1A和FHIT基因启动子甲基化和肺癌有关;p16、RASSF1A和FHIT基因启动子甲基化水平与肺癌的组织学类型和临床分期无关，与个体的年龄、性别、吸烟史均无关。
　　 2.基于荧光定量PCR检测p16、RASSF1A和FHIT基因启动子甲基化水平有助于肺癌早期诊断。

目录

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摘要

图表索引

中英文缩略词表

1 引言

2 材料与方法

2．1 材料

2．1．1 实验对象

2．1．2 主要的仪器与试剂

2．1．3 主要试剂的配置

2．1．4 软件

2．2 方法

2．2．1 实验方法

2．2．2 统计学方法

3 结果

3．1 研究对象一般资料

3．2 DNA甲基化检测结果

3．2．1 引物特异性鉴定

3．2．2 p16、RASSF1A和FHIT基因启动子甲基水平的检测结果

3．3 血清中CA125、CA19-9、CEA、NSE和CYFRA21-1的检测结果

3．3．1 肺癌组和对照组CA125、CA19-9、CEA、NSE和CYFRA21-1水平的比较

3．3．3 指标的评价

4 讨论

4．1 p16、RASSF1A和FHIT基因甲基化与肺癌的关系

4．2 p16、RASSF1A和FHIT基因与CA125、CA19-9、CEA、NSE和CYFRA21-1对肺癌诊断价值的比较

5 结论

参考文献

综述

致谢

个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果