Wnt/β-catenin通路关键分子在NK/T细胞淋巴瘤组织中的表达及其意义

摘要

背景与目的:
　　恶性淋巴瘤（Malignant Lymphoma,ML)是一组异质性的起自淋巴细胞或其前体细胞的疾病，主要发生于淋巴结或结外部位淋巴组织、器官，可分为霍奇金淋巴瘤（Hodgkins lymphoma,HL）和非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkins lymphoma,NHL）。NK/T细胞淋巴瘤是在临床表现、免疫学、组织学等方面表现特殊的恶性淋巴瘤。在亚洲尤其是我国的发病率高于欧美国家。在我国约占所有淋巴瘤的21.38％。其主要表现为外鼻、鼻腔、鼻咽、颚等部位的进行性毁损性病变，有时伴发 B症状，如发热、消瘦、盗汗等。个别严重患者可以产生全身系统性播散，病程进展快，预后相对较差。其发病机制尚不清楚。近年来关于肿瘤发病机制的研究中信号通路是一个热点。Wnt/β-catenin信号通路作为经典的信号通路，该通路的中心枢纽分子β-catenin在胞浆的聚集被认为是其激活的标志，已被证实与多种肿瘤的发生有关。但在NK/T细胞淋巴瘤中鲜有报道。本课题就Wnt/β-catenin信号通路中关键分子β-catenin、c-myc及cyclinD1在NK/T细胞淋巴瘤中的表达及意义作以探讨。通过检测Wnt/β-catenin信号转导通路中关键成员β-catenin、c-myc及cyclinD1在NK/T细胞淋巴瘤(NKTCL)细胞株（SNK-6和 YTS）和组织切片中的表达，阐明其与 NKTCL病人临床病例特征及预后的关系。
　　方法:
　　采用荧光定量 PCR技术检测Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin、c-myc、cyclinD1在NKTCL细胞株SNK-6、YTS及正常对照组外周血NK细胞的mRNA表达量，收集50例NK/T细胞淋巴瘤组织切片和20例淋巴结反应性增生切片，细胞免疫化学和组织免疫化学SP法检测β-catenin、c-myc和cyclinD1蛋白在NKTCL细胞株SNK-6、YTS及NKTCL组织切片中的表达情况，并分析其与临床病例资料及病人预后的关系。
　　结果:
　　1.与正常人外周血NK细胞相比，淋巴瘤细胞株SNK-6、YTS中β-catenin、c-myc、cyclinD1转录水平和蛋白水平的表达量显著升高(P<0.05)，差异均具有统计学意义(P<0.05)。
　　2.与淋巴结反应性增生组织（0%、25%和10%）相比，NKTCL组织中β-catenin、c-myc和cyclinD1蛋白的阳性表达率(24%、56%和52%)显著升高，差异具有统计学意义(P<0.05)。c-myc和cyclinD1蛋白的阳性表达与β-catenin的阳性表达呈正相关。
　　3.β-catenin和cyclinD1的表达与患者的临床分期III-IV期(Ann Arbor分期)成正相关（P<0.05)，c-myc的表达与患者的临床分期III-IV期(P<0.05)和Ki-67水平成正相关(P<0.05)，三者与其它临床病理特点（如年龄、性别、疗效、LDH水平等）均无相关性(P＞0.05)。β-catenin阳性表达病人的中位总生存期(23.662±2.768个月)低于阴性表达病人(31.65±1.780个月)，差异有统计学意义(P<0.05)。
　　结论:
　　1. Wnt/β-catenin信号通路中重要分子（β-catenin、c-myc及cyclinD1）在NKTCL细胞株（SNK-6、YTS）和组织切片中高表达，并且其表达水平与临床分期和患者预后有关联。
　　2. Wnt/β-catenin信号通路的激活可能在NKTCL的发生中有一定作用。

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英文缩略词索引

前言

第一部分 Wnt/β-catenin通路关键分子在NK/T细胞淋巴瘤细胞系中的表达

前言

1 材料、试剂及仪器

1.1 实验细胞系

1.2 实验试剂

1.3 实验仪器

2 实验方法

2.1 细胞培养、冻存和复苏和细胞计数

2.2 正常NK细胞的提取

2.3 RNA提取和逆转录反应

2.4Real-time PCR检测NK/T细胞淋巴瘤细胞系和正常NK细胞中β-catenin、c-myc和cyclinD1mRNA的相对表达量

3 统计学处理

4 结果

5 讨论

第二部分 Wnt/β-catenin通路关键分子在NK/T细胞系及组织切片中的表达

前言

1 材料及方法

1.1 材料、试剂与仪器

1.2 标本来源

2 实验方法

2.1 免疫细胞化学染色

2.2 免疫组织化学染色

2.3 免疫组化结果的评分准则

3 统计学分析

4 结果

4.1 细胞免疫组化和组织切片免疫组化结果

4.2 β-catenin、c-myc和cyclinD1蛋白表达与临床指标间的关系

4.3 c-myc、cyclinD1蛋白表达与β-catenin之间的相关性

4.4 β-catenin 表达与NKTCL中位总生存期之间的关系

5 讨论

参考文献

综述： 经典WNT 信号转导通路在恶性淋巴瘤中的研究进展

个人简历及在校期间发表论文

致谢