利用高通量组织微阵列研究Wnt/β-catenin信号通路关键分子的异常表达在鼻咽癌变中的作用

摘要

目的：检测Wnt/β-catenin信号通路关键分子（Wnt5a、β-catenin、c-myc、CyclinD1、E-cadherin、COX-2以及EB病毒潜伏膜蛋白1（Epstein-Barr virus（EBV）latent membrane protein1，LMP-1）在鼻咽癌（Nasopharyngeal carcinoma， NPC）癌变过程不同病理形态组织中的蛋白表达，探讨Wnt/β-catenin信号通路异常激活在NPC发生、发展中的作用机制，从中筛选NPC相关分子标志物。 方法：①免疫组化S-P法检测Wnt5a、β-catenin、c-myc、CyclinD1、E-cadherin、COX-2和LMP-1在前期制作的NPC癌变过程不同阶段组织、不同组织类型、不同病理分级、不同临床分期的高通量NPC组织芯片中的蛋白表达。②SPSS16.0统计软件对Wnt5a、β-catenin、c-myc、CyclinD1、E-cadherin、COX-2和LMP-1的蛋白表达与NPC临床病理特征进行X2检验和Spearman's相关分析；灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和正确率对所检测蛋白作为NPC诊断分子标志物的有效性进行综合评估。 结果：⑴Wnt5a、c-myc、CyclinD1、COX-2和LMP-1蛋白在NPC中的阳性表达率显著高于异型增生鼻咽上皮、增生鼻咽上皮和正常鼻咽上皮（P<0.05； P<0.01；P<0.01）；异型增生鼻咽上皮中的Wnt5a、c-myc、CyclinD1、COX-2和LMP-1蛋白阳性表达也显著高于增生鼻咽上皮和正常鼻咽上皮（P<0.05； P<0.01）； NPC组织中β-catenin蛋白的膜表达减弱或缺失，呈胞浆/胞核异位高表达，其在NPC中的胞浆/胞核阳性率显著高于异型增生鼻咽上皮、增生鼻咽上皮和正常鼻咽上皮（P<0.05； P<0.01；P<0.01）； E-cadherin在正常鼻咽粘膜上皮中的阳性表达率显著高于异型增生鼻咽上皮和NPC（P<0.05； P<0.01）。⑵Wnt5a、c-myc和CyclinD1蛋白在临床Ⅲ和Ⅳ期NPC组织中的阳性表达率显著高于临床Ⅰ和Ⅱ期（P<0.01；P<0.01；P<0.01），有淋巴结转移的NPC组织中Wnt5a、c-myc和CyclinD1蛋白阳性表达率显著高于无淋巴结转移NPC组织（P<0.01；P<0.01；P<0.01）；临床Ⅲ和Ⅳ期NPC组织中β-catenin蛋白的胞浆或胞核异位表达率显著高于临床Ⅰ和Ⅱ期（P<0.05），有淋巴结转移的NPC组织中β-catenin蛋白的胞浆或胞核异位表达率显著高于无淋巴结转移NPC（P<0.01）；E-cadherin蛋白在临床Ⅲ和Ⅳ期NPC组织中的阳性表达率显著低于临床Ⅰ和Ⅱ期（P<0.05），E-cadherin蛋白在有淋巴结转移的NPC组织中的阳性表达率显著低于无淋巴结转移NPC（P<0.01）； COX-2蛋白的阳性表达与NPC病理分型、临床分期和有无淋巴结转移均无显著相关性（P>0.05）； LMP-1蛋白在临床Ⅲ和Ⅳ期NPC组织中的阳性表达显著高于临床Ⅰ和Ⅱ期（P<0.05），非角化性NPC中LMP-1蛋白阳性表达率显著高于未分化癌和角化性癌（P<0.05； P<0.05），LMP-1蛋白阳性表达与NPC有无淋巴结转移无显著相关性（P>0.05）。⑶NPC组织中Wnt5a蛋白阳性表达与β-catenin蛋白胞浆/胞核异位表达呈显著正相关性（r=0.354，P<0.05）；β-catenin蛋白阳性表达分别与COX-2、c-myc和CyclinD1蛋白的阳性表达存在显著正相关性（r=0.382，r=0.432，r=0.425，P<0.01），而与E-cadherin蛋白的阳性表达呈负相关性（r=-0.215，P<0.01）； NPC组织中LMP-1蛋白的阳性表达分别与β-catenin、CyclinD1和c-myc蛋白的阳性表达存在显著正相关性（r=0.418，r=0.427，r=0.486，P<0.01）。⑷联合检测LMP-1、Wnt5a、β-catenin和c-myc的蛋白表达用于鉴别NPC与非癌鼻咽组织的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和正确率优于其他组合。 结论：①Wnt/β-catenin信号通路中关键分子Wnt5a和β-catenin的异常高表达，导致其下游分子c-myc、CyclinD1和COX-2的激活和E-cadherin的失活，在NPC的发生、发展过程中起重要作用。②Wnt/β-catenin信号通路关键分子Wnt5a、β-catenin、c-myc和CyclinD1蛋白表达增加和E-cadherin蛋白表达下调与NPC的恶性生物学行为有关，Wnt5a、β-catenin、c-myc、CyclinD1和E-cadherin蛋白可作为判断NPC临床进展和转移预测的分子标志。③EB病毒编码的LMP-1可间接引起β-catenin的异常表达进而激活Wnt/β-catenin信号通路下游的癌基因c-myc和CyclinD1，LMP-1与c-myc和CyclinD1在NPC发生发展过程中可能具有相互增强的协同作用，共同促进或相继导致鼻咽上皮细胞的恶性转化和NPC的发生发展。④联合应用LMP-1、Wnt5a、β-catenin和c-myc可作为区别NPC与非癌病变的较好分子标志。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：符号说明

声明

第一章 前言

第二章 材料与方法

第三章 结果

第四章 讨论

第五章 结论

第六章 附图

参考文献

综述一 Wnt/β-catenin信号转导通路异常及其在NPC发生中的作用

综述二 组织芯片技术在肿瘤分子标志物研究中的应用

致谢

攻读学位期间的研究成果