水红花子对流产模型小鼠子宫肥大细胞和TNF-α的影响

摘要

目的：通过研究水红花子对细菌脂多糖(LPS)和米非司酮(RU486)诱发流产小鼠子宫肥大细胞(MC)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的影响，初步探讨水红花子保胎作用机理，为临床中药免疫疗法治疗流产提供理论和实验依据。
　　 方法：昆明种小鼠随机分为对照组(A1，A2)和实验组。实验组又分为细菌脂多糖(LPS)流产模型组(B1)、米非司酮(RU486)流产模型组(B2)、中药单处理组(C1，E1，C2，E2)、中药LPS双处理组(D1，F1)、中药RU486双处理组(D2，F2)，共12组别。A1、A2、B1、B2均为孕2d开始灌DW，连续灌至8d，其中在孕6d：A1腹腔注射PBS(3μl/g)(下同)，A2背部皮下注射含少许乙醇的DDW(250μl)(下同)，B1腹腔注射LPS(3μl/g)(下同)，B2背部皮下注射RU486(250μl)(下同)；C1、C2、D1、D2均为孕2d开始灌水红花子水煎剂，连续灌至孕8d，其中在孕6d:C1腹腔注射PBS，C2皮下注射含少许乙醇的DDW，D1腹腔注射LPS，D2皮下注射RU486。实验中特别选择了传统保胎中药黄芩白术配伍E1、E2、F1、F2为水红花子各相应组别阳性药物对照。各组均与孕8d剖开腹腔观察子宫和胚胎生长状况，记录胚胎着床数和发生流产情况，比较LPS、RU486引起小鼠的流产效果；取子宫，通过HE染色观察组织学结构变化，甲苯胺蓝染色检测不同实验处理小鼠子宫肥大细胞的分布和数量，及制成子宫组织匀浆，用酶联免疫吸附技术(ELISA)检测子宫组织TNF-α的含量变化。
　　 结果：(1)LPS流产模型：①平均胚胎数比较：与A1相比，B1平均胚胎数极显著减少(P＜0.01)；中药处理组及中药LPS双处理组小鼠子宫胚胎数趋近与正常对照A1组，差异不显著。其中C1组即水红花子单处理平均胚胎数最多；②流产率比较：A1组自然流产率为20％;LPS注射使B1组小鼠流产率达到70％;D1、F1组流产率分别降到15％和33％;C1、E1的流产率均为0。(2)RU486流产模型：①平均胚胎数比较：B2组与其他各组相比，平均胚胎数均极显著减少(P＜0.01)；水红花子处理C2、D2组均比对照A2组平均胚胎数显著增加(P＜0.05)，其中水红花子处理C2组平均胚胎数目最多。②流产率比较：A2组流产率达到25％;RU486处理B2组流产率为80％;D2、E2和F2组流产率分别为30％、20％和50％，其中C2组小鼠流产率最低为10％。(3)水红花子对流产模型小鼠子宫肥大细胞的影响：各组小鼠子宫肥大细胞存在严重的脱颗粒现象，主要分布于子宫肌层、肌间血管层、外膜以及系膜三角区。LPS处理B1组与对照A1组相比，肥大细胞数目显著减少(P＜0.05)；RU486处理B2组与对照A2组相比，肥大细胞数目极显著减少(P＜0.01)；水红花子单处理即C1、C2组肥大细胞数目最多，且C1与对照A1组相比有显著性的差异(P＜0.05)；而黄芩白术单处理组E1、E2在各实验组中肥大细胞数目均为最低水平；其他各组肥大细胞数目分布不一，并且出现了不同程度的差异性。(4)水红花子对流产模型小鼠子宫TNF-α细胞因子含量的影响：流产模型B1、B2组小鼠子宫组织中的TNF-α含量极显著都高于其他各组(P＜0.01)；水红花子处理组C1与D1相比，TNF-α含量无显著差异，黄芩白术处理组E1、F1中TNF-α含量最少。C2、D2、F2与对照组A2相比，含量都有所增加，但并无显著差异，E2组TNF-α含量最少。
　　 结论：(1)水红花子与传统保胎中药黄芩白术在对抗LPS、RU486诱导小鼠流产中有着相同的功效。在受孕第2～8d使用中药预防，水红花子对抗LPS、RU486的流产作用效果显著，平均胚胎数与流产率趋近正常水平。(2)水红花子通过调节肥大细胞的数量分布及其释放某些活性物质，拮抗LPS诱导子宫内膜产生的炎症反应，抑制RU486对孕酮的拮抗作用，维持子宫局部免疫水平，向有利于正常妊娠的优势转变。(3)水红花子抑制由LPS、RU486诱导的TNF-α过度分泌，阻止Th1型细胞因子对胚胎的免疫排斥，维持Th1/Th2平衡。在对抗LPS、RU486诱导小鼠流产机理中，水红花子通过多种途径调节免疫细胞、细胞因子、激素等因素共同参与维持母胎局部免疫平衡。