三种食药用真菌的胞外多糖发酵与应用研究

摘要

本实验选择三种食药用真菌进行培养基的优化，通过红外光谱技术、气相色谱技术、热重仪对精制胞外多糖(EPS)的结构，生物活性及在烟草中的应用进行一系列研究。三种真菌分别为肉色迷孔菌、铜色牛肝菌、肺形侧耳。结果表明:
　　肉色迷孔菌，最优培养基50 g/L麦芽糖，5g/L大豆粉，5mM/L CaCl2，最优培养条件为温度28℃，pH值为6。在5-L自控式发酵罐中培养20d，在13d时EPS含量达到最大值4.52g/L，并且EPS含量与粘度、菌丝形态学等各个指标具有一定的相关性。经过Sevag法除去蛋白质，通过Sepharose CL-6B凝胶柱分离纯化，通过红外光谱仪得知肉色迷孔菌胞外多糖只含有1种多糖组分，经过红外光谱仪分析得知该多糖组分有甘露糖结构的特征峰，经过气相-质谱仪分析分析发现该多糖经水解后主要是由阿洛糖组成。热稳定分析仪得出样品从189℃开始分解。肉色迷孔菌胞外多糖具有很好的清除自由基能力，并且呈现线性关系。肉色迷孔菌精制胞外多糖在烟气中的转移率为1.36％～1.95％,当烟丝中的胞外多糖含量达到烟丝质量的0.06％时吸食品质最好。
　　铜色牛肝菌，最优培养基50g/L蔗糖，5g/L酵母粉，最优培养温度为25℃，pH值为6。在5-L自控式发酵罐中培养，铜色牛肝菌胞外多糖在第5d含量达到最大值1.84g/L，发酵液的粘度与菌丝含量在培养的1-10d具有很好的相关性。经过Sepharose CL-6B凝胶柱层析发现铜色牛肝菌有三个多糖组分（Fr-Ⅰ、Fr-Ⅱ、Fr-Ⅲ），经水解后发现Fr-Ⅰ、Fr-Ⅱ、Fr-Ⅲ分别由10、13、13种单糖组成。Fr-Ⅰ热稳定性Fr-Ⅱ和Fr-Ⅲ高，Fr-Ⅰ由室温加热到170℃时多糖质量迅速下降，即出现失重台阶，Fr-Ⅱ和Fr-Ⅲ分别在156℃和155℃时出现失重台阶。对铜色牛肝菌粗胞外多糖与精制胞外多糖组分进行抗氧化分析，结果表明，铜色牛肝菌胞外多糖具有很高的抗氧化活性。铜色牛肝菌粗胞外多糖的转移率最高为2.01％。
　　肺形侧耳，最优培养基60g/L蔗糖，6g/L大豆粉，5mM KH2PO4和MgSO4，最优培养条件为温度25℃，pH值为5。在5-L自控式发酵罐中培养在第7d时EPS含量达到最大值为6.36g/L，EPS含量与菌丝含量、粘度、菌丝球平均直径呈现一定的相关性。经过分离纯化得知肺形侧耳只含有1种多糖组分，经过红外光谱仪分析发现该组分是一种富含葡萄糖和甘露糖的酸性多糖。肺形侧耳胞外多糖在烟气中的转移率与多糖添加量呈现良好的量效关系。

目录

声明

致谢

摘要

第一章 文献综述和研究的现状与意义

1 概述

1．1 真菌多糖的研究概述

1．2 肉色迷孔菌、铜色牛肝菌、肺形侧耳简介

1．3 真菌胞外多糖的生物活性

1．4 真菌多糖的构效关系

1．5 深层液体发酵生产真菌多糖

1．6 真菌多糖在烟草中的应用

2 研究的现状与意义

2．1 国内外研究的现状与展望

2．2 研究的目的与意义

第二章 三种真菌培养基与培养条件的优化

1 引言

2 材料与方法

2．1 材料

2．2 实验方法

3 实验结果

3．1 葡萄糖标准曲线的绘制

3．2 肉色迷孔菌

3．3 铜色牛肝菌

3．4 肺形侧耳

4 本章小结

第三章 三种真菌液体深层发酵培养形态学与流变学的研究

1 引言

2 材料与方法

2．1 材料

2．2 实验方法

3 结果分析

3．1 肉色迷孔菌5-L自控式发酵罐深层发酵形态学与流变学的研究

3．2 铜色牛肝菌5-L自控式发酵罐深层发酵形态学与流变学的研究

3．3 肺形侧耳5-L自控式发酵罐深层发酵形态学与流变学的研究

4 本章小结

第四章 三种真菌胞外多糖分离纯化及结构分析

1 引言

2 材料与方法

2．1 材料

2．2 试剂

2．3 仪器

2．4 实验方法

3 结果分析

3．1 肉色迷孔菌发酵胞外多糖的分离纯化及结构分析

3．2 铜色牛肝菌胞外多糖的分离提纯与结构分析

3．3 肺形侧耳发酵胞外多糖的分离提纯与结构分析

4 本章小结

第五章 三种真菌胞外多糖组分抗氧化活性研究

1 前言

2 材料与方法

2．1 材料

2．2 试剂

2．3 仪器

2．4 试验方法

3 试验结果

3．1 ABTS法标准曲线的绘制

3．2 肉色迷孔菌精制胞外多糖抗氧化活性的测定

3．3 铜色牛肝菌胞外多糖抗氧化活性的测定

3．4 肺形侧耳精制胞外多糖抗氧化活性的测定

4 本章小结

第六章 三种真菌胞外多糖在烟草中的应用

1 前言

2 材料与方法

2．1 材料

2．2 试剂

2．3 仪器

2．4 实验方法

3 结果与分析

3．1 肉色迷孔菌胞外多糖在卷烟中的转移率分析

3．2 肉色迷孔菌胞外多糖添加到卷烟后的感官评吸

3．3 铜色牛肝菌胞外多糖在卷烟中的转移率分析

3．4 铜色牛肝菌胞外多糖添加到卷烟后的感官评吸

3．5 肺形侧耳胞外多糖在卷烟中的转移率分析

3．6 肺形侧耳胞外多糖在卷烟中感官评吸

4 本章小结

第七章 结论与展望

1 结论

1．1 深层发酵条件与培养基的优化

1．2 深层发酵形态学与流变学的研究

1．3 三种真菌胞外多糖的分离纯化和结构分析

1．4 三种真菌精制胞外多糖组分抗氧化活性的测定

1．5 三种真菌在烟草中的应用

2 展望

参考文献