中药复方抑瘤饮体内影响小鼠S180肿瘤组织中巨噬细胞浸润及TNF-α、iNOS、Bcl-2、Bax表达的动态研究

摘要

目的：肿瘤是威胁人类健康的重大疾病；中药复方因具有多途径、多靶点、毒副作用小等优势，在肿瘤治疗和辅助治疗方面已成为新的研究热点。肿瘤组织中巨噬细胞(Macrophage，Mψ)浸润和抗瘤相关分子及凋亡相关基因的表达，与肿瘤的生长密切相关；了解中药对之影响，是研究中药抗肿瘤机制的重要方面。中药复方抑瘤饮(以下简称“抑瘤饮”简写为“YLY”)是在中医抗肿瘤理论指导下组成的方剂，其主要成分为：黄芪、党参、云芝、三七、仙鹤草、墨旱莲、鸡血藤、卷柏、大枣、陈皮等；临床应用和预实验显示其体内确有抗肿瘤效果。为揭示其体内抗肿瘤的机制，本研究以小鼠荷S180肿瘤后每日灌服抑瘤饮，于不同时间点取瘤制切片行免疫组化染色，动态观察对肿瘤组织中Mψ浸润及肿瘤坏死因子-α(Tumornecrosisfactor-α，TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(Induciblenitricoxidesynthase，iNOS)、Bcl-2和Bax表达的影响；以明确抑瘤饮体内抗肿瘤效应是否与之有关。 方法：给BALB/c小鼠右腋皮下接种浓度为1×107/mL的S180细胞，0.2mL/只。其中，抑瘤饮组于荷瘤24h后开始灌服抑瘤饮，2次/日，0.5mL/次；荷瘤对照组(以下简称“对照组”简写为“control”)同时灌服凉开水，2次/日，0.5mL/次。每日观察小鼠和肿瘤生长情况。在灌胃10天、20天、30天、40天时杀鼠称取体重，取瘤称取瘤重。取肿瘤制成石蜡切片：HE染色，常规病理观察；免疫组化法检测肿瘤组织中Mψ的浸润及TNF-α、iNOS、Bcl-2和Bax的表达，并以图像分析系统进行分析。图像分析，以阳性酶点(Positiveenzymedot，PED)表示阳性染色范围大小；以灰度值(Greyscale，GS)表示阳性染色强度，取值范围为0～255，其数值越大表示阳性染色越弱，其数值越小表示阳性染色越强。 结果：1抑瘤饮对小鼠S180移植肿瘤生长的动态影响 对照组小鼠接种肿瘤细胞后，第4、5日可触及肿瘤；5～10日肿瘤生长速度最快；10日后肿瘤生长速度有所下降；20日后又渐上升。与对照组相比，抑瘤饮组小鼠肿瘤生长速度，前5天虽稍显低，但无统计学意义(P＞0.05)；5天后直至20天，降低即有显著意义(P＜0.05)；20天后降低更为显著(P＜0.01)。 抑瘤饮组于第10、20、30、40天时间点：抑瘤率分别为21.89％±3.49％、28.77％±5.12％、48.65％±4.53％和59.74％±5.71％；瘤指数分别为5.09±0.93、6.00±0.73、6.58±1.49和11.61±6.07。对照组瘤指数在相应时间点分别为6.42±0.55、7.63±1.49、10.34±3.65和20.50±7.81，均明显高于抑瘤饮组(P＜0.05)，且两组差异逐渐增大。 2肿瘤组织HE染色显微镜观察 自20天后，抑瘤饮组与对照组相比，间质增多，肿瘤细胞排列稀疏，核分裂象少，坏死和凋亡多。各时间点抑瘤饮组肿瘤组织中淋巴细胞和Mψ浸润均多于对照组。 3肿瘤组织免疫组化染色 3.1抑瘤饮对肿瘤组织中Mψ浸润的动态影响3.1.1Mψ-GS：10天、20天、30天、40天点时，抑瘤饮组(分别为159.72±15.44、162.21±14.45、165.10±11.45、162.39±14.94)与对照组(分别为157.51±12.66、168.12±11.75、165.43±7.21、166.48±17.52)相比，均无显著差异(均P＞0.05)。动态分析：两组组内各时间点间均无显著差异。 3.1.2Mψ-PED：10天、20天、30天、40天点时，抑瘤饮组(分别为952.23±79.52、888.03±100.24、654.40±55.09、561.09±55.42)与对照组(分别为528.60±47.96、382.31±37.83、290.34±57.14、94.37±18.68)相比，均显著升高(均P＜0.01)。动态分析：对照组呈下降趋势；抑瘤饮组也呈下降趋势，但仍高于对照组。 3.2抑瘤饮对肿瘤组织中抗瘤相关分子表达的动态影响 3.2.1TNF-α： 3.2.1.1TNF-α-GS：10天点时，抑瘤饮组(157.58±5.26)与对照组(158.30±5.77)相比，无显著差异(P＞0.05)；20天、30天、40天点时，抑瘤饮组(分别为147.19±7.80、161.56±5.63、162.32±5.67)与对照组(分别为167.89±6.85、176.37±9.08、175.97±5.88)相比，均显著降低(均P＜0.01)。动态分析：对照组呈逐渐上升趋势；抑瘤饮组10天、30天、40天点间无显著差异，而20天点时低。 3.2.1.2TNF-α-PED：10天点时，抑瘤饮组(1304.60±120.83)与对照组(1193.94±145.99)相比，无显著差异(P＞0.05)；20天、30天、40天点时，抑瘤饮组(分别为1130.49±132.71、972.51±109.52、836.74±91.57)与对照组(分别为403.60±66.76、126.03±25.03、79.26±15.44)相比，均显著升高(均P＜0.01)。动态分析：对照组呈下降趋势；抑瘤饮组也呈下降趋势，但仍高于对照组。 3.2.2iNOS：3.2.2.1iNOS-GS：10天点时，抑瘤饮组(163.66±8.14)与对照组(160.33±7.16)相比，无显著差异(P＞0.05)；20天、30天点时，抑瘤饮组(分别为150.58±8.42、150.94±4.52)与对照组(分别为159.34±5.86、161.94±12.31)相比，均显著降低(均P＜0.05)；40天点时，抑瘤饮组(150.12±4.00)与对照组(163.57±5.95)相比，降低极显著(P＜0.01)。动态分析：对照组各时间点间无显著差异；抑瘤饮组20天、30天、40天点间无显著差异，但均低于10天点。 3.2.2.2iNOS-PED：10天点时，抑瘤饮组(287.00±75.25)与对照组(245.77±72.62)相比，无显著差异(P＞0.05)；20天30天、40天点时，抑瘤饮组(分别为762.57±136.13、1024.83±227.79、1121.43±164.85)与对照组(分别为439.23±85.55、377.29±86.55、346.41±46.11)相比，均显著升高(均P＜0.01)。动态分析：对照组在20天点达到最大值后开始下降；抑瘤饮组呈升高趋势。 3.3抑瘤饮对肿瘤组织中凋亡相关基因表达的动态影响 3.3.1Bcl-2： 3.3.1.1Bcl-2-GS：10天、20天、30天、40天点时，抑瘤饮组(分别为160.27±18.57、157.75±14.70、159.04±10.57、156.76±18.72)与对照组(分别为154.94±9.82、155.93±7.85、158.83±8.84、158.76±10.49)相比，均无显著差异(均P＞0.05)。动态分析：两组组内均无显著差异。 3.3.1.2Bcl-2-PED：10天、20天、30天、40天点时，抑瘤饮组(分别为1911.26±301.38、1917.49±201.81、1749.11±308.47、1228.89±173.33)与对照组(分别为2509.77±254.65、2503.57±210.06、2395.40±273.34、2368.86±267.86)相比，均显著降低(均P＜0.01)。动态分析：对照组各时间点间无显著差异；抑瘤饮组呈下降趋势。 3.3.2Bax： 3.3.2.1Bax-GS：10天点时，抑瘤饮组(173.31±8.29)与对照组(177.22±11.68)相比，无显著差异(P＞0.05)；20天点时，抑瘤饮组(157.35±8.88)与对照组(179.76±19.70)相比，显著降低(P＜0.05)；30天、40天点时，抑瘤饮组(分别为141.78±17.58、151.59±15.24)与对照组(分别为170.69±16.01、181.93±13.52)相比，降低极显著(均P＜0.01)。动态分析：对照组各时间点间无显著差异；抑瘤饮组呈下降趋势。 3.3.2.2Bax-PED：10天、20天、30天、40天点时，抑瘤饮组(分别为1105.17±189.54、1229.74±156.55、1349.17±228.04、1583.17±241.94)与对照组(分别为229.23±37.81、273.34±41.83、267.03±35.40、255.74±28.28)相比，均显著升高(均P＜0.01)。动态分析：对照组各时间点间无显著差异；抑瘤饮组呈上升趋势。 结论：1抑瘤饮能够时间依赖性抑制小鼠体内S180移植肿瘤的生长。 2抑瘤饮能够时间依赖性提高Mψ在小鼠S180肿瘤组织中的浸润。 3抑瘤饮能够时间依赖性提高TNF-α、iNOS和Bax在小鼠S180肿瘤组织中的表达。 4抑瘤饮能够时间依赖性地降低Bcl-2在小鼠S180肿瘤组织中的表达。 5抑瘤饮体内抗瘤作用，可能与其在肿瘤组织中的上述作用有关。

目录

摘要

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 中药对巨噬细胞抗肿瘤功能的影响

致谢

个人简历