枸杞总多糖对2型糖尿病大鼠的降糖作用及免疫系统相关因子的影响

摘要

糖尿病是由遗传和环境因素相互作用引起的一种内分泌代谢紊乱综合症，在世界范围内已成为继心脑血管疾病、癌症之后危害人类健康的第三大疾病，其中85％～95％为2型糖尿病。2型糖尿病主要以糖脂代谢紊乱、血糖升高、胰岛细胞损伤和胰岛素分泌不足等为主要特征，有研究证实，糖尿病病人可出现免疫功能的紊乱。目前，环孢菌素、硫唑嘌呤、胸腺肽、白蛋白和免疫球蛋白等用于2型糖尿病免疫治疗有严重的副作用，且大多不能从根本上改善机体的免疫功能。因此，近年来国内外研究者从天然植物中筛选具有降糖和免疫调节作用的植物多糖。枸杞多糖是传统中药枸杞子的主要活性组分，是一种非特异免疫增强剂，现代药理学研究表明其具有降血糖、降血脂、调节机体免疫及抗氧化等多种生物学活性，具有良好的药用开发价值。本研究拟从宁夏枸杞中提取纯化枸杞总多糖，阐明枸杞总多糖对2型糖尿病大鼠的降糖作用及免疫功能的影响，旨在为综合开发利用枸杞总多糖应用于2型糖尿病的临床防治提供理论依据。
　　 第一部分
　　 枸杞总多糖的提取纯化。
　　 目的:从宁夏枸杞中提取纯化枸杞总多糖。
　　 方法:利用水提醇沉法从宁夏枸杞中提取水溶性多糖，采用D101大孔树脂层析柱对粗多糖进行纯化，应用苯酚-硫酸法对多糖含量进行测定，并通过正交实验对多糖的提取条件进行优化。
　　 结果:经优化后的枸杞总多糖提取工艺为:枸杞经烘干后，于80℃经石油醚回留脱脂3h，80℃水提多糖4次，每次30 min，枸杞∶水量=1∶8，醇沉乙醇的含量为80％，三氯乙酸用量为溶液终体积的1％。此条件下的枸杞多糖的提取率为5.27％，含量为24.2％。
　　 小结:枸杞总多糖得率和纯度均较好，适用于药理学实验。
　　 第二部分
　　 枸杞总多糖的降糖作用研究。
　　 目的:探讨枸杞总多糖对2型糖尿病大鼠的降血糖作用。
　　 方法:采用高脂高糖饮食联合小剂量注射STZ的方法制备2型糖尿病大鼠模型。选取糖尿病模型大鼠40只，随机均分为5组:模型组，枸杞总多糖低剂量(100 mg/kg)、中剂量(200 mg/kg)和高剂量(400 mg/kg)干预组，格列苯脲干预组（阳性药物组）;另取8只大鼠作为正常对照组。
　　 通过酶比色法、放射免疫分析法、ELISA等方法测定枸杞总多糖对2型糖尿病大鼠空腹血糖(FBG)水平、空腹胰岛素(FINS)水平、C-肽(C-P)水平、糖化血红蛋白(HbA1c)含量的影响，通过光镜和电镜分别观察枸杞总多糖对2型糖尿病大鼠胰岛和肝脏的组织结构影响;采用免疫组化法检测枸杞总多糖对2型糖尿病大鼠胰岛素分泌的影响。
　　 结果:糖尿病模型组大鼠的FBG水平显著高于正常对照组大鼠（P＜0.005)，FINS、C-P和HbA1c水平则显著低于正常对照组大鼠（P＜0.005)。以不同剂量的枸杞总多糖干预治疗糖尿病模型组4周后，各治疗组糖尿病大鼠的FBG水平显著降低（P＜0.005)，FINS、C-P和HbA1c水平则显著升高（P＜0.005)，且呈现出明显的剂量依赖性。此外，糖尿病对照组大鼠的胰腺和肝脏组织呈现明显的病理学形态，胰岛萎缩，胰岛细胞减少，肝脏组织脂质积累严重。经枸杞总多糖干预治疗后，糖尿病大鼠的胰腺组织病理形态和肝脏脂肪变性明显改善，胰岛细胞胰岛素分泌增多。
　　 小结:枸杞总多糖可有效控制2型糖尿病模型大鼠的空腹血糖水平，调节糖代谢，减轻糖尿病模型大鼠胰岛β细胞损伤，促进胰岛β细胞分泌胰岛素，改善肝脏脂质代谢。枸杞总多糖对2型糖尿病模型大鼠的治疗作用呈现出明显的剂量依赖性。
　　 第三部分
　　 枸杞总多糖对2型糖尿病大鼠免疫功能的调节作用。
　　 目的:探讨枸杞总多糖对2型糖尿病大鼠免疫功能的调节作用。
　　 方法:动物造模和分组及给药方法同前，采用western bolts法检测枸杞总多糖对2型糖尿病模型组大鼠脾脏组织中细胞因子白细胞介素-1 IL-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。
　　 结果:Western bolts结果表明，与正常对照组比，糖尿病模型组大鼠脾脏组织中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达均明显升高;以不同剂量的枸杞总多糖干预治疗糖尿病模型组大鼠4周后，各治疗组糖尿病模型大鼠脾脏组织中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达均显著降低（P＜0.05）。
　　 小结:枸杞总多糖可有效抑制2型糖尿病大鼠脾脏组织中白细胞介素-1β(IL-1β、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。
　　 结论:枸杞总多糖得率和纯度均较好，适用于药理学实验;枸杞总多糖可有效控制2型糖尿病大鼠的空腹血糖水平，减轻糖尿病大鼠胰岛β细胞损伤，促进胰岛β细胞分泌胰岛素，改善肝脏脂质代谢;枸杞总多糖可能通过抑制2型糖尿病大鼠脾脏组织中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达发挥免疫调节作用。

目录

声明

摘要

英文缩写

引言

第一部分 枸杞总多糖的提取纯化

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

第二部分 枸杞总多糖的降糖作用研究

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

第三部分 枸杞总多糖对2型糖尿病大鼠免疫功能的调节作用

前言

材料与方法

结果

附图

讨论

小结

结论

参考文献

综述 2型糖尿病的主要发病机制及防治研究进展

致谢

个人简历