SET8基因3'非翻译区的miR-502结合位点单核苷酸多态性与上皮性卵巢癌的相关研究

摘要

目的：
　　MicroRNA(miRNA)是近年来发现的一类高度保守的小分子非编码RNA，长度约为22个核苷酸，人类基因组中有1/3以上基因是受其调控的。miRNA通过与靶基因mRNA完全或不完全互补进而抑制靶mRNA编码的蛋白质的合成。越来越多的研究结果表明，miRNA在许多生物过程中具有重要作用，如胚胎发育、细胞分化与增殖、细胞凋亡、肿瘤的发展和激素分泌等。单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism，SNP)是指在基因组水平上由于单个核苷酸的改变引起的DNA序列的多态性，在人类基因组中分布广泛，是不同个体间最主要的遗传变异。miRNA在靶基因上的结合位点的SNP可以改变靶基因的表达，从而影响患肿瘤的风险。
　　SET8基因又称为SETD8，PR-SET7或KMT5a，编码组蛋白H4赖氨酸20单甲基转移酶，这种酶通过甲基化组蛋白进而调节基因的转录、细胞的生长周期及肿瘤的发生发展，SET8基因3'UTR的miR-502结合区域内存在rs16917496多态位点，以往研究发现该位点多种肿瘤的发生和/或预后相关。本研究拟对 SET8基因3’端非翻译区单核苷酸多态性rs16917496与上皮性卵巢癌患者的发病风险、临床特征及预后的相关性进行研究，为上皮性卵巢癌的早期诊断寻找新的分子靶点，并改善卵巢癌患者的预后。
　　方法：
　　1.研究对象及随访选取100例2008年1月-2012年12月期间在河北医科大学第二医院进行妇科手术且术后组织学病理证实为上皮性卵巢癌的石蜡切片包埋组织切片，100例患者术前未接受任何治疗，详细记录患者相关临床资料（包括年龄、临床分期、残留癌灶大小等），通过电话随访患者术后的生存情况，随访截止时间2014年12月31号。另选取在河北医科大学第二医院体检健康的100例女性（除外与卵巢癌相关的疾病），获得知情同意后，详细记录体检资料，采集静脉血备用。
　　2.基因组DNA提取、扩增及测序：提取基因组DNA，DNA鉴定合格后，采用PCR技术扩增目的片段，大小为299bp，上游引物为：5’-CCTGGTCAG TGGTCAGCAAAT-3’，下游引物为：5’-CTGGGAAAC ACGCTCAAAA TC-3’。产物经琼脂糖凝胶电泳证实后进行双向重复测序。
　　3.统计学分析：采用SPSS21.0统计软件进行统计学分析，采用χ2检验或Fisher确切概率法比较计数资料。单因素分析使用Kaplan-Meier方法和Log-Rank方法，单因素分析中P值小于0.05的因素纳入COX风险回归模型进行多因素分析。P<0.05被认为有统计学意义。
　　结果：
　　1.在病例组与对照组之间，以基因型C/C为对照，与T/T基因型进行比较，差异无统计学意义(P>0.05)，与C/T、C/T+T/T基因型进行比较，差异有统计学意义（P﹤0.05），说明此位点与卵巢癌的发病风险相关，C/C基因型卵巢癌的发病风险较低。
　　2.病例组中rs16917496位点各基因型与各临床特征均无相关性，差异无统计学意义(P>0.05)。
　　3.对上皮性卵巢癌患者进行生存分析，SET8基因的rs16917496多态位点C/C、C/T、T/T基因型患者的3年生存率分别为80％、74.1%、58.5%，尚不能认为此位点与上皮性卵巢癌患者的预后相关。
　　4.将单因素分析中有显著性差异的纳入COX模型进行多因素分析，结果显示，FIGO手术病理分期、残留癌大小与上皮性卵巢癌患者的死亡风险相关。
　　结论:
　　1.SET8基因3’端非翻译区的miR-502结合位点单核苷酸多态性与上皮性卵巢癌的发病风险相关。
　　2.尚不能认为SET8基因3'端非翻译区miR-502结合位点单核苷酸多态性与上皮性卵巢癌患者的预后相关。SET8基因的rs16917496位点基因型与上皮性卵巢癌患者的临床特征）均没有相关性。

目录

声明

英文缩写

前言

材料与方法

1 研究对象

2 实验方法

3 统计学处理

结果

1 等位基因及基因型的分布

2 病例组中 rs16917496 位点各基因型与不同临床特征之间的关系

3 生存分析

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述:MicroRNA与卵巢癌的研究进展

致谢

个人简历