Fish检测多发性骨髓瘤染色体异常及预后分析

摘要

目的：
　　应用荧光原位杂交(flurorescence in situ hybridization,FISH)技术检测多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）患者染色体异常的发生情况及其与 MM患者性别、年龄、分期、血常规、生化等临床资料、疗效及预后的关系，明确疾病预后危险分层，探讨其临床意义。
　　方法：收集河北医科大学第三医院血液科自2013年2月1日至2017年1月1日初诊的66例MM患者骨髓标本，进行CD138磁珠分选富集浆细胞后，利用FISH技术，采用特异性探针（包括1q21、TP53、D13S319、IGH/CCND1、IGH/FGFR3、IGH/MAF探针）检测66例MM患者染色体异常的发生情况。
　　结果：
　　1 FISH结果
　　1.1染色体异常的检出率：在66例MM患者中55例出现染色体异常，总异常检出率为83.3％（55/66）。累及探针个数≥2个占56.1%(37/66)，用TP53探针检测17号染色体缺失，阳性率为12.1%（8/66）；IGH探针检测14号染色体异常，阳性率为54.5%（36/66）:其中IGH/MAF阳性率为3.0%(2/66)，IGH/FGFR3阳性率为13.6%(9/66)，IGH/CCND1阳性率为25.8%(17/66)；用D13S319探针检测13号染色体缺失，D13S319阳性率为40.9%（27/66）；用1q21探针检测1号染色体异常，1q21扩增阳性率为47.0%（31/66）。
　　1.2 D13S319与IGH之间的关系：D13S319与IGH/FGFR3卡方检验发现D13S319阳性患者常伴随IGH/ FGFR3阳性，具有统计学意义（P=0.020＜0.05），其他染色体异常之间无相关性。
　　1.3染色体异常与患者临床资料之间的关系：1q21扩增与HGB降低有关(P=0.028)；TP53与 LDH升高有关(P=0.041)，与首次化疗后感染有关(P=0.017)；D13S319与高年龄有关(P=0.020)；IGH/CCND1与骨损伤数量增加有关(P=0.003)，与白蛋白减少有关(P=0.049); IGH/FGFR3与白蛋白减少有关(P=0.010)。其他染色体异常与MM患者临床资料无关。
　　2 FISH结果与患者生存期关系
　　随访至2017年1月1日13例（19.7%）患者死亡。FISH结果采用Kaplan-Meier法计算生存率并绘制生存曲线，单因素分析发现TP53阳性（8例）和阴性（53例），OS分别为28.250和42.605个月，PFS分别为17.857和28.415个月，具有统计学意义（P=0.027和P=0.045）；1q21异常者（31例）PFS明显短于正常者（30例），PFS为21.017和31.896个月，具有统计学意义（P=0.022），但 OS无统计学差异（P=0.622）；IGH/FGFR3异常者（9例）和正常者（50例），OS分别为17.889和41.672个月，PFS分别为12.063和28.757个月，具有统计学意义（P=0.037和P=0.025）；IGH/MAF基因异常者（2例）和正常者（57例），OS分别为7.500和41.457个月，不具有统计学差异（P=0.137），PFS分别为4.000和28.518个月，具有统计学差异（P=0.000）；D13S319基因异常者（25例）和正常者（36例）OS分别为39.926和37.926个月，PFS分别为28.466和19.270个月，差异无统计学意义（P=0.700和P=0.182）。将1q21探针检测的61例患者分为三组：1q21阴性组、单纯1q21阳性、1q21阳性并伴有其他染色体异常者，OS分别为43.618、24.314和13.500个月，无统计学差异（P＞0.05）；PFS分别为31.896、20.400和8.125个月，1q21阴性组和单纯1q21阳性之间存在统计学差异（P=0.038），其他无统计学差异（P＞0.05）。
　　3临床资料与患者生存期关系
　　3.1 ISS、R-ISS分期与预后的关系：根据ISS分期，Ⅰ期5例，Ⅱ期23例，Ⅲ期38例，OS分别为41.000、34.436和35.775个月，Ⅰ期＞Ⅱ期＞Ⅲ期，PFS分别为23.250、27.647和25.768个月，差异均无统计学意义（P=0.918和P=0.918）；根据R-ISS分期，Ⅰ期5例，Ⅱ期47例，Ⅲ期14例，OS分别为47.022、37.585和20.674个月；PFS分别为23.250、30.005和13.464个月，Ⅲ期PFS较Ⅰ期/Ⅱ期明显缩短，差异均具有统计学意义（P=0.039和P=0.000）；根据mSMART分期，OS低危41.771个月＞中危38.599个月＞高危22.111个月，PFS低危31.055个月＞中危20.045个月＞高危16.375个月，高危PFS较低危明显缩短，差异均有统计学意义（P=0.036和P=0.010）。
　　3.2临床指标和预后的关系：HB＜100g/L较≥100g/L者 OS为31.862和44.324个月，无统计学差异（P=0.136）；PFS分别为20.935和30.552个月，具有统计学差异（P=0.020）。PLT＜100×109/L较≥100×109/L者OS明显缩短，OS分别为11.906和43.738个月，具有统计学差异（P=0.000）；PFS分别为15.641和28.029个月，无统计学差异（P=0.069）。LDH≥225U/L较＜225U/L者OS、PFS缩短， OS分别为23.375和44.601、PFS分别为15.631和29.217个月，具有统计学差异（P=0.003和P=0.002）。首次化疗具有感染的患者 OS较未感染的患者明显缩短，分别为30.236和47.917个月，具有统计学意义（P=0.005）；PFS无统计学差异（P=0.673）。3.3预后多因素分析发现 mSMART高危患者、浆细胞≥30%、PLT＜100×109/L、ALB＜35g/L、LDH≥225U/L可以使OS缩短；R-ISSⅢ期、HB＜100g/L、PLT＜100×109/L、Cr≥175umol/L、首次化疗存在感染的患者PFS缩短。
　　结论：
　　1 FISH方法发现MM患者最常见的基因异常为IGH易位，染色体异常多发生在在14、1、13号染色体。
　　2 D13S319阳性患者常伴随IGH/FGFR3阳性。
　　31q21扩增与HGB降低有关；TP53与LDH升高有关，与首次化疗后感染有关；D13S319与高年龄有关；IGH/CCND1与骨损伤数量增加有关，与白蛋白减少有关;IGH/FGFR3与白蛋白减少有关。其他染色体异常与MM患者临床资料无关。
　　4 TP53、IGH/FGFR3和IGH/MAF是不良的预后因素，OS和PFS均具有统计学意义；D13S319 OS和PFS差异均无统计学意义；1q21阳性和阴性组PFS具有统计学意义，但OS无统计学差异；1q21阴性组和单纯1q21阳性之间PFS存在统计学差异。
　　5 ISS分期OS和PFS差异均无统计学意义；R-ISS分期OS和 PFS差异均具有统计学意义；mSMART分期，高危OS和PFS较低危明显缩短，差异均有统计学意义。
　　6 HB＜100g/L较≥100g/L者OS无统计学差异，PFS具有统计学差异；PLT＜100×109/L较≥100×109/L者OS明显缩短，OS具有统计学差异， PFS无统计学差异；LDH≥225U/L较＜225U/L者OS、PFS缩短，均具有统计学差异；首次化疗具有感染的患者OS较未感染的患者明显缩短，具有统计学意义，PFS无统计学差异。
　　7预后多因素分析发现 mSMART高危患者、浆细胞≥30%、PLT＜100×109/L、ALB＜35g/L、LDH≥225U/L可以使OS缩短；R-ISSⅢ期、HB＜100g/L、PLT＜100×109/L、Cr≥175umol/L、首次化疗存在感染的患者PFS缩短。

目录

声明

英文缩写

前言

材料与方法

1 研究对象

2 材料与方法

结果

2 FISH结果

3 FISH结果与患者生存期关系

4 临床资料与患者生存期关系

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述:简述多发性骨髓瘤重要遗传学检测方法

致谢

个人简历