山楂叶中酚类成分的HPLC分析

摘要

山楂是一种重要的药食两用植物资源，众多药理研究表明其具有改善心血管系统等方面的生理活性，这些功效与其中所含有的原花青素、黄酮等酚类成分密切相关。山楂叶中黄酮含量较高，同时含有一定量的原花青素及酚酸成分，具有很高的开发和应用价值。本实验室前期在对中国山楂的研究中首次发现红果酸(Eucomic acid)这一特有的酚酸类次生代谢产物。本文在之前研究的基础之上，开展了以下的研究工作:
　　1.采用高效液相色谱法建立了一套分析山楂叶及果实中酚酸、原花青素及黄酮成分的检测方法，其中用于检测山楂叶样品中的绿原酸、红果酸、表儿茶素、原花青素B2、C1、D1、牡荆素鼠李糖苷、金丝桃苷及异槲皮苷成分的色谱条件为:色谱柱:Hypersil BDS C18(250mm×4.6mm id，5μm);温度:45℃;流动相A:甲醇/乙腈=1∶2含500μL/L的甲酸，B:500μL/L甲酸水溶液;梯度程序:(min/A％)0/8，26/20，30/50，35/50，37/8，47/8;流速:0.8mL/min;光电二极管阵列检测器，波长:280、350nm;进样量:10μL;峰面积外标法定量。用该方法对山楂叶中的9种酚类成分进行分析，各成分具有较好的分离度，相对标准偏差在0.77％～2.06％之间，回收率为93.7％～116.2％，线性范围在20～5000ng之间，最低检出限为10～15ng之间，回归方程的相关系数r介于0.9994～0.9999，实现了在35分钟内同时对山楂叶中9种酚类成分的分析检测。
　　用于检测山楂果实中的绿原酸、表儿茶素、原花青素B2、B5、C1、C2、D1、E1、金丝桃苷及异槲皮苷成分的色谱条件为:色谱柱:Hypersil BDS C18(250 mm×4.6mmid，5μm);温度:35℃;流动相A:甲醇/乙腈=3∶7含500μL/L的甲酸，B:500μL/L甲酸水溶液;梯度程序:(min/A％)0/13，10/14，15/22，23/30，26/100，31/100，33/13，43/13;流速:0.8mL/min;光电二极管阵列检测器，波长:280、350nm;进样量:5μL;峰面积外标法定量。用该方法对山楂果实中的10种酚类成分进行分析，各成分具有较好的分离度，相对标准偏差在0.24％～1.63％之间，回收率为91.3％～107.6％，线性范围在20～5000ng之间，最低检出限为10～15ng之间，回归方程的相关系数r介于0.9994～0.9999，实现了在30分钟内同时对山楂叶中9种酚类成分的分析检测。
　　2.采用新建立的分析方法对不同生长时期及不同叶序的山楂叶中酚类成分进行测定。结果表明，山楂叶中黄酮成分含量较高，以碳苷黄酮为主，同时还含有可观含量的原花青素及酚酸类成分。这些成分的含量随生长发育呈缓慢增长的趋势，并在10月份的果实成熟期酚类成分总含量达到最大值，此时叶中3种黄酮、2种酚酸及3种原花青素的总含量分别为8.01、4.57、5.35g/g D.W;同一枝条不同叶序的山楂叶片中总酚含量变化不大，在16.4～22.7mg/g D.W之间，但其中各成分的比例不同，基部叶中碳苷黄酮更高，梢部的氧苷黄酮等成分比例增加。
　　3.采用新建立的分析方法对原产于中国7个省市的29个具有代表性的山楂品种的叶、花及果实中主要酚类成分进行了分析。结果表明，山楂样品中酚类成分的含量随着品种与器官部位的不同而发生显著性的差异，但其酚类成分的种类相同。山楂叶中总酚含量为24.2～36.2mg/g D.W，其中主要成分为黄酮，其次为酚酸成分。叶中总黄酮的含量以花期叶中较高(15.7mg/g D.W)，且以碳苷黄酮为主。叶中酚酸成分中红果酸的含量较多，其含量约为5.6～6.3mg/g D.W。山楂花的总酚含量为19.2mg/g D.W，其中原花青素成分较高(7.4mg/g D.W)，酚酸成分含量(6.01mg/g D.W)稍次之。山楂果实中总酚含量为10.5mg/g F.W，其中原花青素成分占总酚含量的96％。同时发现同一品种的山楂叶、花及果中各酚酸成分间具有不同程度的相关性。

目录

声明

摘要

缩写词目录

1 前言

1．1 山楂的种质资源

1．2 山楂叶中酚类成分的研究

1．2．1 山楂叶中的酚类成分

1．2．2 山楂叶的药理作用

1．2．3 山楂叶中酚类成分的检测方法及质控指标

1．2．4 山楂叶中原花青素成分的研究

1．2．5 山楂叶中黄酮成分的研究

1．2．6 山楂不同品种、器官和生长时期酚类成分的研究

1．3 研究目的及内容

1．3．1 研究目的和意义

1．3．2 研究内容

2 山楂叶及果中酚类成分HPLC分析方法的建立

2．1 材料与试剂

2．1．1 植物材料

2．1．2 试剂

2．1．3 试验仪器

2．2 试验方法

2．2．1 样品前处理

2．2．2 山楂叶中酚类物质成分测定的HPLC检测条件

2．2．3 山楂鲜果中酚类物质成分测定的HPLC检测条件

2．3 结果与分析

2．3．1 色谱条件的选择

2．3．2 方法的精密度

2．3．3 方法的回归方程、线性范围、最低检出限

2．3．4 方法的加标回收率试验

2．4 小结

3 不同生长时期山楂叶中酚类成分含量的变化

3．1 试验材料

3．1．1 植物材料

3．1．2 试剂

3．1．3 主要仪器

3．2 试验方法

3．2．1 样品处理

3．2．2 色谱条件

3．2．3 不同生长时期的山楂叶中酚类成分的测定

3．2．4 不同叶序的山楂叶中酚类成分的测定

3．3 结果与讨论

3．3．1 不同生长时期的山楂叶中酚类成分含量的变化

3．3．2 不同叶序的山楂叶中酚类成分含量的变化

4 不同品种山楂叶酚类成分含量的测定

4．1 试验材料与仪器

4．1．1 植物材料

4．1．2 试剂

4．1．3 试验仪器

4．2 试验方法

4．2．1 样品前处理

4．2．2 山楂花和山楂叶中酚类物质成分测定的HPLC检测条件

4．2．3 山楂果实中酚类物质成分测定的HPLC检测条件

4．2．4 数据处理

4．3 结果与分析

4．3．1 花期山楂叶中酚类成分的含量

4．3．2 山楂花中酚类成分的含量

4．3．3 山楂果中酚类成分的含量

4．3．4 秋季山楂叶中酚类成分的含量

4．4 讨论

4．4．1 不同品种的山楂花、叶及果实中总酚成分的比较

4．4．2 不同产地山楂花、叶、果中酚类成分的含量

4．4．3 不同生殖器官的山楂中酚类成分含量的差异

4．5 小结

5 结论

参考文献

附录

作者简历

致谢