紫金龙药材及其治疗失眠复方片剂的药学研究

摘要

紫金龙Dactylicapnos scandens为罂粟科紫金龙属植物紫金龙Dactylicapnos scandens(D.Don,),Hutch.的干燥根[1]，是我国云南省白族传统习用中草药，有镇痛、止血、消炎、降压之功效，可治疗多种疼痛，在《云南省药品标准》[2]和《云南中药资源名录》[3]中都有记载，曾被《中国药典》(1977年版)[4]收载。但原标准只有性状、理化鉴别等项，不能很好的控制药材质量。本课题应用现代分离、分析技术及方法，对紫金龙药材进行深入研究，以提高药材的质量标准。 紫金龙除具有上述的镇痛、止血等药理作用外，在云南民间还用于治疗失眠。据此，云南省中医中药研究所组成了以紫金龙为君药，治疗失眠的复方制剂。经初步临床实验证实其治疗失眠的有效率为88％；但原制剂以生药粉直接装胶囊，存在制备工艺粗糙、质量控制不严等缺点。为方便患者服用、扩大应用范围，本课题应用药剂学制剂技术将其研制成复方片剂。 本课题主要内容包括以下六个部分： 一：紫金龙化学成分的研究药理学实验证实生物碱是紫金龙中具有镇痛等作用的主要活性成分[5]；本文针对生物碱成分采用硅胶柱层析分离、薄层板分离等方法，共分离得到4个化合物，鉴别了其中3个，分别是：异紫堇定(d-isocorydine,DS-1)，紫堇定(d-corydine,DS-2)，原阿片碱(protopine，DS-3)。并制备了纯度大于98％的紫堇定对照品。 二、紫金龙药材质量标准的研究在原有药材质量标准的基础上，增加了薄层鉴别、含量测定等项。 以薄层色谱法鉴别紫金龙药材，结果表明：分离效果佳，斑点清晰。 建立了同时测定药材中4种异喹啉类生物碱的高效液相色谱方法。方法学研究表明，该法灵敏度高，准确，重现性好。测定了3批药材中青藤碱、原阿片碱、紫堇定和异紫堇定的含量，它们的平均值分别是：0.0072％、0.86％、1.29％和2.41％。 建立了紫外分光光度法测定药材中总生物碱含量。方法学研究表明，该法准确，可靠，重现性好。以异紫堇定计，测定的3批药材中总生物碱的含量分别是：6.11％、5.21％和6.87％。三、治疗失眠复方提取工艺的研究首先建立了协同延长戊巴比妥钠睡眠时间的失眠模型，采用该模型对不同工艺路线制备的复方提取液进行药效学研究，以药效学实验结果为依据，优选出了最佳工艺路线为水煎煮提取。 然后以异紫堇定转移率、总生物碱转移率和浸膏得率为指标，采用正交实验对水提取工艺条件进行优化，最终确定了最优的水提工艺条件为：加10倍量水，煎煮3次，每次1小时。提取工艺重现性实验结果表明，重现性良好；说明优化的提取工艺条件合理可行。 并以异紫堇定、总生物碱等有效成分转移率、干膏粉得率等为指标，分别通过单因素试验和正交试验，对影响真空浓缩干燥和喷雾干燥制备干浸膏的影响因素进行考察，确定了干浸膏的制备方法和最优的工艺条件为60℃真空浓缩干燥40h，且工艺重现性良好。 四、治疗失眠复方片剂制备工艺研究比较了湿法挤压制粒和流化床一步制粒等不同制粒方法，确定制粒工艺为湿法挤压制粒。并采用单因素试验，对影响片剂制备的各种因素进行考察，确定了最佳处方和工艺条件；测定了干颗粒的临界相对湿度值为77％，为控制片剂制备的环境条件提供依据。 五、治疗失眠复方片剂质量标准及初步稳定性试验建立了复方片剂的鉴别和含量测定方法，并进行了片剂的常规制剂检查。 以薄层色谱法鉴别方中君药紫金龙、臣药石菖蒲，结果表明分离效果佳，斑点清晰。 建立了同时测定复方片剂中异紫堇定和紫堇定含量的高效液相色谱法。方法学研究表明，该法灵敏度高，准确，重现性好。测定的3批复方片剂中异紫堇定的含量分别是：2.81％、2.74％、2.77％；紫堇定的含量分别是：1.20％、1.16％、1.20％。 建立了紫外分光光度法测定复方片剂中总生物碱的含量。方法学研究表明，该法简便，准确，灵敏度高，重现性好。以异紫堇定计，测定的3批复方片剂中总生物碱的含量分别是：7.12％、6.82％、7.10％。 检查了复方片剂的外观、片重差异、崩解时间等，结果均符合《中华人民共和国药典》(2005年版)一部附录ID片剂项下的规定。 复方片剂包薄膜衣后，采用铝塑密封包装，进行加速试验和长期试验，考察其在不同条件下的稳定性。40℃，相对湿度75％的加速试验考察了3个月(正在继续考察中)，片剂的外观及紫堇定、异紫堇定、总生物碱的含量均无明显变化；长期稳定性试验表明，在温度25℃，相对湿度60％的条件下放置3个月(正在继续考察中)，片剂的外观及紫堇定、异紫堇定、总生物碱的含量均无明显变化，说明本品基本稳定。 六、异紫堇定在SD大鼠体内的药动学过程研究本文研究了异紫堇定对照品、紫金龙药材及其治疗失眠复方制剂中异紫堇定的大鼠体内药动学过程。 首先建立了异紫堇定体内样品的制备方法和含量测定方法；采用3倍甲醇沉淀蛋白制备血浆样品，结果显示：血浆中内源性物质对异紫堇定色谱峰无干扰；采用HPLC方法测定大鼠血浆中异紫堇定的浓度，结果：异紫堇定在37.968～2373ng·ml-1范围内线性关系良好，方法的灵敏度高，回收率、重现性良好。 然后采用药代动力学软件3P87对药时曲线进行拟合，结果表明异紫堇定的大鼠体内过程符合一室模型；异紫堇定对照品组、紫金龙药材组及治疗失眠复方制剂组t1/2分别为57.14±24.80min、55.23±48.69min、56.05±22.46min；Tmax分别为20.00±8.94min、21.67±7.53min、18.33±4.08min；Cmax分别为1907.310±1785.872ng·ml-1、1832.215±1341.109ng·ml-1、1347.413±995.545ng·ml-1。 本文首次研究了异紫堇定的体内药动学过程，并与紫金龙药材及其治疗失眠复方制剂中异紫堇定的体内药动学过程进行了比较，结果显示三组的t1/2a、t1/2、Tmax和Cmax等主要药动学参数无显著差异(P>0.05)，说明紫金龙药材中其它成分及复方配伍不影响异紫堇定在大鼠体内的药动学过程。

目录

声明

前言

第一部分紫金龙药材化学成分研究

1材料与仪器

1.1材料

1.2仪器

2提取分离

2.1碘化铋钾显色剂的配制

2.2提取分离

3.鉴定

4.紫堇定对照品的制备

4.1分离纯化流程图

4.2紫堇定对照品纯度的测定

5.讨论与小结

第二部分紫金龙药材质量标准研究

1.材料与仪器

1.1材料

1.2仪器

2.实验方法与结果

2.1药材的性状

2.2药材的鉴别研究

2.3药材中单体生物碱成分的含量测定

2.4药材中总生物碱的含量测定

3.讨论与小结

第三部分治疗失眠复方片剂提取工艺研究

1.材料与仪器

1.1材料

1.2仪器

1.3实验动物

2实验方法与结果

2.1提取工艺研究

2.2浓缩干燥工艺研究

3讨论与小结

第四部分 治疗失眠复方片剂处方和制备工艺研究

1.材料与仪器

1.1材料

1.2仪器

2实验方法与结果

2.1片剂的评价指标

2.2制粒工艺研究

2.3辅料的筛选

2.4片剂制备工艺研究

2.5片剂制备工艺重现性试验

2.6颗粒临界相对湿度的测定

3讨论与小结

第五部分治疗失眠复方片剂质量标准研究及初步稳定性试验

1材料与仪器

1.1材料

1.2仪器

2实验方法与结果

2.1薄层色谱鉴别

2.2复方片剂中异紫堇定和紫堇定的含量测定

2.3复方片剂中总生物碱的含量测定

2.4复方片剂的常规制剂检查

2.5复方片剂的初步稳定性研究

3讨论与小结

第六部分异紫堇定的大鼠体内药动学研究

1材料与仪器

1.1材料

1.2仪器

1.3实验动物

2.实验方法与结果

2.1体内药物分析方法的建立

2.2给药方案与样品采集

2.3血药浓度的测定

2.4数据处理

3讨论与小结

全文总结

致谢

参考文献

附录