褪黑素对水牛卵母细胞体外成熟及胚胎体外发育的影响

摘要

活性氧基团(ROS)被认为是不利于卵母细胞体外成熟和胚胎体外发育的因素。在体外培养条件下，胚胎遇到比体内更多的氧化因子。褪黑素可以提高卵母细胞质量，使卵母细胞免于氧化危害。褪黑素和其代谢物组成了清除ROS的高效的级联反应，褪黑素有别于其他的抗氧化剂就是因为这个特性。
　　 本研究探讨在水牛卵母细胞体外成熟液和胚胎培养液中添加褪黑素对卵母细胞体外成熟和胚胎发育的影响。
　　 试验一，在水牛卵母细胞体外成熟培养液中，分别添加三种浓度的褪黑素，即10-10mol/L，10-9mol/L，10-8mol/L，不添加为对照组。目的在于探讨添加不同浓度褪黑素的成熟液水牛卵母细胞的成熟情况。Ⅳmol/L24h后，以第一极体的排出作为成熟标准。试验结果表明，10-9mol/L试验组成熟率与其他试验组相比，差异不显著(46.28±1.74％vs43.15±5.24％，43.40±3.12％，P>0.05)，但显著高于对照组(46.28±1.74％vs32.90±2.21％，P<0.05)。
　　 试验二，仅在胚胎培养液中添加褪黑素情况下，10-8mol/L组分裂率与其他组相比，差异不显著(59.6％vs53.6％，49.5％，48.O％，P>0.05)，然而，其囊胚率显著高于对照组(34.3％vs20.6％，P<0.05)。根据试验一结果，在成熟培养阶段添加最优浓度(10-9mol/L)褪黑素的同时，在胚胎培养液中也添加不同浓度的褪黑素(10-8mol/L，10-9mol/L，10-10mol/L，0mol/L)。结果表明，10-9mol/L组分裂率与其他组相比无显著差异(70.0％vs64.8％，65.2％，60.9％，P>0.05)，囊胚率与其他试验组相比也没有显著差异(28.9％vs15.4％，26.1％，25.3％，P>0.05)，但显著高于对照组(28.9％vs15.4％，P<0.05)。
　　 试验三，在水牛卵母细胞成熟培养液中分为添加褪黑素(试验组)和不加褪黑素(对照组)，IVM24h后，通过DCHFDA荧光染色方法测定水牛卵母细胞中的ROS含量。结果表明，与对照组的荧光强度相比，褪黑素处理组的ROS水平显著低于对照组。
　　 试验四，通过实时定量PCR测定线粒体拷贝数。在水牛卵母细胞成熟液中添加10-9mol/L褪黑素和不加褪黑素，IVM24h。试验组和对照组的拷贝数没有差别。这说明褪黑素对线粒体拷贝数没有影响。
　　 本研究结果表明，褪黑素可以提高水牛卵母细胞体外成熟率和早期胚胎体外发育率，同时还参与清除活性氧的过程。

目录

文摘

英文文摘

第一部分 文献综述

1 关于褪黑素

2 褪黑素对卵母细胞体外成熟和体外胚胎发育的影响

2.1 褪黑素对卵母细胞的成熟的影响

2.2 褪黑素对胚胎体外培养的影响

2.3 褪黑素对卵母细胞和胚胎体外培养的调控机制

3 褪黑素及其代谢产物的抗氧化作用

3.1 褪黑素的直接清除自由基功能

3.2 褪黑素的间接抗氧化功能

3.3 N1-乙酰5-甲氧犬脲酰胺(AMK)的清除自由基功能

3.4 环-3-羟基褪黑素(3-OHMEL)的清除自由基功能

3.5 N1-乙酰-N2-甲酰-5-甲氧犬脲酰胺(AFMK)的清除自由基功能

3.6 褪黑素抗氧化的高效性

4 褪黑素对线粒体的影响

第二部分 实验研究

第一章 褪黑素对水牛卵母细胞体外成熟的作用

1 材料与方法

2 试验结果

3 讨论

4 小结

第二章 褪黑素对水牛早期胚胎体外培养的影响

1 材料与方法

2 试验结果

3 讨论

4 小结

第三章 褪黑素对水牛卵母细胞成熟阶段活性氧基团(ROS)的清除作用

1 材料与方法

2 试验结果

3 讨论

4 小结

第四章 在体外成熟培养过程中添加褪黑素对水牛卵母细胞线粒体拷贝的影响

1 材料与方法

2 试验结果

3 讨论

4 小结

总结论

参考文献

附表重要术语词中英文对照表

致谢

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