肝细胞生长因子在牙髓中的表达及生物学作用

摘要

肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)是一种间充质来源的多效性细胞因子，通过与其跨膜受体c-met结合对多种组织器官的生长发育、形态发生、组织修复再生具有重要的生理调节功能。HGF已被发现对肝细胞、上皮细胞、平滑肌细胞等具有显著的促细胞分裂、运动作用，此外还在血管生成、上皮间充质细胞相互间作用中有重要的地位。牙髓组织作为一种外胚间充质来源的组织，其损伤的修复源于牙髓组织中的间充质细胞的分化能力和组织的修复能力，本课题首次对肝细胞生长因子在牙髓修复中的作用进行研究，初步阐明了HGF在牙髓修复中的作用机制。 本研究采用了免疫组织化学方法和分子生物学方法，利用体外细胞培养技术，对肝细胞生长因子及其受体在正常牙髓组织和细胞中的表达情况进行了研究；采用动物模型研究HGF在修复性牙本质形成过程中的表达情况；此外还对HGF对体外培养的人牙髓细胞的生物学作用进行了系统研究，探讨其对牙髓细胞生长、分化的影响，并对ERK/MAPK信号通路在其中的作用进行了初步研究。本实验拟通过系统的实验研究，对肝细胞生长因子在牙髓修复中的作用机制进行研究，也为牙髓病变的早期修复寻找新的生物学途径。本实验共分为四个部分： 第一部分：肝细胞生长因子在牙髓中的表达。采用免疫组化、细胞培养和分子生物学方法研究肝细胞生长因子及其受体在正常牙髓组织、牙髓细胞中的表达情况：发现体外培养的牙髓细胞可检测出HGFmRNA及C-METmRNA的表达，HGF在体外培养的牙髓细胞中胞浆呈阳性表达，胞核阴性表达；在健康离体牙的牙髓组织中成牙本质细胞层和血管内皮细胞胞浆均呈弱阳性表达。 第二部分：肝细胞生长因子在大鼠修复性牙本质中的表达。采用动物模型和免疫组化，研究肝细胞生长因子在大鼠牙髓修复过程中的表达。实验结果表明：修复性牙本质形初期(3d)，肝细胞生长因子在大鼠牙髓细胞及成牙本质细胞胞浆中呈强阳性表达，积分光密度值为8.995±0.943；损伤后15d表达呈阳性(5.624±0.951)，但逐渐减弱，30d(4.073±0.127)和正常对照组大鼠牙髓细胞及成牙本质细胞胞浆中呈弱阳性表达(4.279±0.348)。说明HGF参与了牙髓损伤早期修复及修复性牙本质形成的过程。 第三部分：肝细胞生长因子对牙髓细胞生物学作用的研究。采用细胞培养、细胞生物学检测及分子生物学方法，了解肝细胞生长因子对牙髓细胞生长、分化的影响。 第四部分ERK/MAPK通路在肝细胞生长因子对牙髓细胞作用中的作用研究。采用用100μg/L HGF作用于细胞，ERK/MAPK通路阻断剂U0126预处理细胞，分析ERK/MAPK信号通路在外源性HGF促进人牙髓细胞分化过程中所起的作用。 结论：牙髓细胞中有肝细胞生长因子及其受体的表达，在早期修复性牙本质形成中的表达明显上调。外源性肝细胞生长因子对人牙髓细胞的生长有明显的促进作用，可缩短牙髓细胞的G1期；增强牙髓细胞的碱性磷酸酶活性，促进碱性磷酸酶和牙本质涎磷蛋白在基因和蛋白水平的表达，促进牙髓细胞的分化；MAPK通路参与了肝细胞生长因子对牙髓细胞的生物学作用，是肝细胞生长因子与其跨膜受体c-met结合后的膜内信号通路。

目录

关键词

摘要

前言

实验一肝细胞生长因子在正常牙髓组织中的表达

1材料和方法

2结果

3讨论

参考文献

实验二肝细胞生长因子在大鼠修复性牙本质形成过程中表达的研究

1材料和方法

2结果

3讨论

参考文献

实验三肝细胞生长因子对牙髓细胞的生物学作用

Ⅰ肝细胞生长因子对牙髓细胞增殖的影响

Ⅱ肝细胞生长因子对牙髓细胞分化影响的体外研究

参考文献

实验四ERK/MAPK信号通路在HGF影响牙髓细胞生物学活性过程中的作用研究

1材料和方法

2结果

3讨论

参考文献

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