人表皮细胞与角膜上皮细胞蛋白质组的差异表达初步研究

摘要

同体或异体角膜移植、同体或异体角膜缘上皮细胞移植，都存在材料来源有限和免疫排斥等缺陷。利用表皮干细胞横向分化产生角膜上皮细胞，为构建组织工程角膜提供种子细胞，在技术层面上已有一定的积累，但是关于横向分化的分子机制依然不清楚。目前国内外关于人表皮细胞与人角膜上皮细胞蛋白质组学研究未见报道。本文应用蛋白质组技术比较表皮细胞与角膜上皮细胞之间的蛋白质表达差异，旨在揭示成体干细胞横向分化的分子机制以及为筛选表皮细胞与角膜上皮细胞的差异分子标签提供参考。 本论文首先分离和培养了人表皮细胞与角膜上皮细胞，然后，应用蛋白质双向凝胶电泳分别对人表皮细胞与角膜上皮细胞总蛋白进行蛋白质组学分析，用基质辅助激光解吸附/电离飞行时间串级质谱法(MALDI-TOF-MS/MS)鉴定差异蛋白，获得人表皮细胞与角膜上皮细胞蛋白质600余个清晰的蛋白质斑点。结果表明人表皮细胞与角膜上皮细胞在蛋白质表达上有较高的相似性以及较好的可比性；在比较分析出的26个差异点中，初步鉴定出四个差异表达蛋白，分别是Chlorideintracellular channel 1 (细胞内氯离子通道1)、Psoriasin、Chain D，HumanB Lactate Dehydrogenase (乳酸脱氢酶B) 和 serine (or cysteine) proteinaseinhibitor (丝氨酸蛋白酶抑制因子)；对四个蛋白的可能功能进行了初步分析。本实验为探索表皮细胞横向分化成角膜上皮细胞的分子机制做出了有益的尝试，并提供了具有一定可操作性的实验方法。

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论文说明:缩略语

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第一章引言

1.1供体缺乏是目前治疗角膜眼表疾病存在的主要问题

1.2组织工程学的研究现状以及种子细胞的开发

1.3表皮干细胞分化为角膜上皮细胞的可行性

1.4当前蛋白质组学的研究进展和技术路线

1.5本研究的目的和意义

第二章人表皮细胞、角膜上皮细胞的体外分离与培养

2.1 材料

2.2方法

2.3结果与分析

2.4讨论

第三章人表皮细胞、角膜上皮细胞总蛋白质样品制备与双向疑胶电泳分离

3.1材料

3.2方法

3.3结果与分析

3.4 讨论

第四章人表皮细胞、角膜上皮细胞差异蛋白的质谱鉴定

4.1材料

4.2方法

4.3结果与分析

4.4讨论

总结与展望

参考文献

附录

致谢