PSMA对前列腺癌LNCaP细胞生物学行为影响的研究

摘要

研究背景:
　　 前列腺癌(Prostate Cancer，PCa)是西方男性最常见的恶性肿瘤之一，在我国随着诊断水平的提高、人们生活方式的改变和人口的老龄化，发病率和死亡率逐年增高。对早期前列腺癌采用根治性手术治疗效果较好，但大多数前列腺癌患者确诊时已是进展期或晚期，肿瘤浸润到前列腺外或者已有远处转移，对于这些患者，采用目前的治疗方法效果均不佳，因此有必要寻找一种新的治疗晚期前列腺癌的有效途径。基因治疗是近年来研究的热点，随着分子生物学、分子遗传学及细胞生物学的发展，基因治疗已发展成为现代医学的一个全新领域，基因治疗有望成为晚期前列腺癌治疗的一个新途径。
　　 对前列腺癌进行基因治疗需要寻找一个理想的靶点，而前列腺特异性膜抗原(Prostate Specific Membrane Antigen，PSMA)是目前研究的一个热点。PSMA是一种前列腺癌相关抗原，由于它具有较高的特异性和位于前列腺上皮细胞膜的特性，且在前列腺癌及其转移灶中表达增高，因此在前列腺癌的早期诊断、判断病情进展、预后以及在前列腺癌的治疗中具有重大意义。PSMA在前列腺正常组织、前列腺增生组织、前列腺癌组织中的表达依次上升，在前列腺癌组织中，其表达水平与病情进展有明显的相关性，发生转移的、对雄激素非依赖的、Gleason评分较高的病例表达水平明显高于未发生转移的、对雄激素依赖的、Gleason评分低的病例，并且PSMA在肿瘤新生血管系统表达，而在正常组织血管内皮不表达。
　　 终上所述，我们猜测PSMA与前列腺癌细胞的增殖、分裂、迁移、侵袭等行为是否存在着一定的联系?
　　 本课题组的前期研究针对PSMA构建了shRNA慢病毒载体，转染能高表达PSMA的前列腺癌LNCaP细胞后，通过real-time PCR检测PSMA mRNA的表达水平，通过Western blot检测PSMA蛋白的表达水平，发现PSMA的mRNA和蛋白均能被稳定抑制，从而获得了能稳定低表达PSMA的前列腺癌LNCaP细胞。同时也培养了未处理的前列腺癌LNCaP细胞及获得了转染了与人类基因无同源性、对PSMA不起干扰作用的siRNA的前列腺癌LNCaP细胞。
　　 研究目的:
　　 研究PSMA对前列腺癌LNCaP细胞生物学行为的影响，为进一步研究PSMA在前列腺癌的发生发展过程中起的作用打下基础。
　　 研究方法:
　　 实验分组：
　　 1)PSMA基因被稳定抑制的前列腺癌LNCaP细胞株(实验组)；
　　 2)未进行处理的前列腺癌LNCaP细胞株(空白组)；
　　 3)转染了与人类基因无同源性、对PSMA不起干扰作用的siRNA的前列腺癌LNCaP细胞株(对照组)。
　　 以上述三组细胞为实验对象，分别进行MTT实验、流式检测细胞周期、细胞划痕实验、Transwell实验，从而比较不同组细胞的生物学行为的变化。MTT实验：处理后在特定时间点测定相应的OD值，检测不同组细胞的增殖能力，绘制生长曲线。
　　 流式检测细胞周期：通过流式细胞仪检测细胞周期，根据处于细胞周期中S期细胞的比例，分析不同组细胞之间的分裂能力。
　　 细胞划痕实验：划痕后在特定时间点进行显微镜下拍照，定性判断不同组细胞的迁移能力。
　　 Transwell实验：通过此实验检测不同组细胞的迁移、侵袭能力。
　　 研究结果:
　　 1.MTT实验：处理后分别检测12小时、24小时、36小时、48小时、60小时、72小时、84小时、96小时三组细胞OD值，绘制生长曲线，结果判断实验组细胞的增殖生长能力较空白组、对照组降低。
　　 2.流式检测细胞周期：实验组S期细胞百分数较空白组及对照组的减少，实验组G0-G1期细胞百分数较空白组及对照组的增加，说明实验组细胞发生G0期阻滞，实验组细胞分裂能力减弱。
　　 3.细胞划痕实验：划痕后于0小时、24小时、48小时对细胞进行显微镜下拍照，通过观察所划痕迹缩窄的程度，定性判断实验组的细胞迁移能力弱于空白组的和对照组的，而空白组和对照组比较差别不明显。
　　 4.Transwell实验：通过对transwell后细胞进行拍照、计数，结果提示实验组细胞较空白组和对照组细胞的迁移侵袭能力降低。
　　 结论:
　　 本实验通过对实验组、空白组、对照组三组细胞进行MTT实验、流式检测细胞周期实验、细胞划痕实验、Transwell实验，根据实验结果比较三组细胞的生物学行为的能力，初步发现PSMA在前列腺癌LNCaP细胞的增殖、分裂、迁移、侵袭能力中起正向调节作用。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章前言

一、前列腺癌诊治现状

二、PSMA的表达、结构与功能

第二章研究目的

第三章材料与研究方法

一、细胞培养

二、MTT实验

三、流式细胞仪检测细胞周期

四、细胞划痕实验

五、Transwell实验

第四章研究结果

一、培养的各组前列腺癌LNCaP细胞图片

二、MTT实验

三、流式细胞仪检测细胞周期

四、细胞划痕实验

五、Tramwell实验

第五章讨论

第六章结论

附录

参考文献

致谢