末水坛紫菜多糖降解物降脂减肥作用的研究及其复合冲剂的研制

摘要

末水坛紫菜，通常指六水紫菜，虽然色泽差，口感粗糙，但其含有大量多糖（20.67％）、蛋白质和矿物元素等营养物质，具有很高开发利用价值。相关研究表明，坛紫菜及其多糖具有增强免疫力、抗肿瘤、抗衰老、降低血清胆固醇等作用。然而，末水坛紫菜多糖的降脂减肥作用研究目前未见报道。本文对末水坛紫菜多糖进行适度降解，研究多糖降解物的体外降脂效果，然后将多糖降解物与山楂黄酮和绞股蓝皂苷进行复配，通过体外高脂细胞模型和体内动物实验探讨三者构成的复合物降脂减肥协同效应，并优化复合物的配方；将复合物制备成冲剂并进行毒性评价。最终，研制开发出安全有效的降脂减肥冲剂。具体内容如下：
　　（1）多糖降解物的制备：采取水提醇沉法提取多糖，经除蛋白、透析等获得末水坛紫菜多糖（PHP）。①超声波法制备多糖降解物：以α-淀粉酶和胰脂肪酶抑制率为考察指标，PHP浓度、超声功率、超声处理时间为因素进行正交试验优化降解条件。结果表明，PHP浓度9.0mg/mL、超声功率800w、超声处理1.0h时、制备的超声多糖降解物（UDP）对ɑ-淀粉酶和胰脂肪酶的抑制活性最高，其半数抑制浓度IC50值分别为15.65mg/mL和16.08mg/mL，远低于未降解多糖（PHP）的47.63mg/mL和66.21mg/mL。②化学法制备多糖降解物：采用实验室前期建立的条件，即利用过氧化氢（H2O2）和维生素C（VC）体系产生的羟自由基（·OH）对PHP进行化学降解，通过超滤得到分子量为10KD-50KD多糖溶液，冷冻干燥得化学多糖降解物（CDP）。
　　（2）多糖降解物、山楂黄酮、绞股蓝皂苷及其复合物体外降脂活性研究和复方优化：以含1%BSA、1.5mmol/L油酸的DMEM培养基孵育HepG2细胞24h后，建立体外高脂细胞模型，以脂质清除率为指标评价多糖降解物、山楂黄酮、绞股蓝皂苷的体外降脂功效，继而利用响应面法对三者的复合物配方进行优化。结果表明：UDP和CDP体外均具有较好的降脂效果，当两者浓度为200μg/mL时，脂质清除率分别达到50.78%和51.21%；而山楂黄酮和绞股蓝皂苷亦显示了良好的体外降脂作用，当浓度分别为200μg/mL和90μg/mL时，脂质清除率分别达51.19%和50.22%；响应面实验结果分析发现：当UDP、山楂黄酮、绞股蓝皂苷分别以浓度194.39μg/mL、216.24μg/mL、91.27μg/mL组合成复合物（CTC）时，在相同用药体积下脂质清除作用最强，脂质清除率高达72.92%，具有较好的协同降脂效应。
　　（3）不同药物体内降脂减肥作用的研究：高脂肥胖大鼠模型建立后分组，其中各给药组灌胃给予不同药物治疗，高脂肥胖模型对照组给予等量生理盐水。给药四周后实验大鼠眼眶取血、解剖，分析相关生化指标。结果表明：与模型对照组相比，不同药物组均显著抑制高脂肥胖大鼠摄食量（P<0.01），降低大鼠体重（P<0.01）和脂肪指数；大鼠血清TC、TG、LDL-C水平明显降低，HDL-C含量升高，其中以复合物中剂量（M-CTC）和UDP中剂量组效果最佳（P<0.01）；同时，不同药物亦可不同程度降低谷草转氨酶（AST）活性，提高脂蛋白脂酶（LPL）、肝脂酶（HL）酶活，并对肝脏损伤具有一定的修复作用。表明多糖降解物及其与中药成分组成的复合物具有良好的降脂、减肥、保肝作用，该实验结果与体外实验一致。
　　（4）复合降脂减肥冲剂的制备及其毒性评价：以经脱腥脱色处理后、粉碎过200目筛的末水坛紫菜为主料，与UDP、山楂黄酮、绞股蓝皂苷构成紫菜复合物，利用添加脱脂奶粉和木糖醇以调整营养和风味，通过单因素实验探讨黄原胶、羧甲基纤维素钠、微晶纤维素对冲剂感官的影响。最后利用正交实验确定了复合降脂减肥冲剂的最佳工艺配方为：以10g粉为单位，其中紫菜复合物4.0g、脱脂奶粉4.0g、木糖醇2.0g，另添加黄原胶0.08g，CMC－Na0.015g，微晶纤维素0.02g。由此配方组合所得冲剂风味、感官评价最佳。毒理学实验结果显示，复合降脂减肥冲剂属于实际无毒级，其LD50>10g/kg。
　　综上所述，UDP、山楂黄酮、绞股蓝皂苷组合存在协同效应，其复合物具备良好的降脂减肥活性。该复合物与紫菜超微粉、脱脂奶粉、木糖醇复配制成的降脂减肥冲剂无毒副作用，其营养保健价值高，具备良好的开发应用前景。

目录

声明

缩略语

第一章 前 言

1.1高血脂和肥胖症研究进展

1.2 紫菜的研究现状

1.3 研究目的意义及创新点

第二章 UDP制备工艺的优化及其理化性质分析

2.1 材料与主要仪器

2.2 实验方法

2.3. 结果与分析

2.4 小结与讨论

第三章 UDP、山楂黄酮、绞股蓝皂苷复合物协同降脂作用的研究

3.1材料与仪器

3.2实验方法

3.3 结果与分析

3.4小结与讨论

第四章 UDP、山楂黄酮、绞股蓝皂苷复合物体内降脂减肥作用的研究

4.1实验材料

4.2实验方法

4.3 结果与分析

4.4小结与讨论

第五章 降脂减肥复合冲剂的研制及其安全性评价

5.1 材料与仪器

5.2实验方法

5.3 急性经口毒性试验

5.4 结果与讨论

5.5 小结与讨论

第六章 结论与展望

6.1结论

6.2 展望

参考文献

致谢

硕士期间论文发表及获奖情况