用于引导RNaseP切割HCMV UL54基因mRNA片段的EGS的体外筛选

摘要

RNaseP是一种核蛋白复合物,它可以在体内特异性地剪切tRNA前体(ptRNA)的5’末端,形成成熟的tRNA。大肠杆菌来源RNaseP包括一个377nt的RNA催化活性单位(M1RNA)和一个约119氨基酸的碱性蛋白(C5),二者均为RNaseP体内活性所必须。在缺乏C5蛋白的体外环境下,M1RNA可在高盐溶液中具备对底物RNA进行催化切割的活性。外部引导序列(ExternalGuideSequence,EGS)是能与底物mRNA互补的小片段RNA,只要二者形成类似ptRNA分子的复合物,M1RNA即可对该复合物双链互补区域进行特异切割。本课题以人类巨细胞病毒(HCMV)UL54基因mRNA片段为靶序列,从13个适合EGS互补的靶序列中,选择4个已经证明可以被M1GS核酶特异切割、并且切割活性较高的靶序列作为研究对象,设计特异性与靶序列部分互补形成茎环结构的EGS,研究M1RNA在EGS引导下对UL54基因mRNA片段的切割作用。

目录

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摘要

一 前言

二 技术路线

三 材料和方法

四 结果与分析

五 讨论

六 结论

七 附录

八 参考文献

九 致谢